一种制备阿托伐他汀手性中间体的方法

摘要

本发明公开了一种以基因工程菌作为全细胞生物催化剂制备6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的方法，具体包括以下步骤：根据羰基还原酶与葡萄糖脱氢酶表达特征，设计并优化羰基还原酶和葡萄糖脱氢酶的串联共表达策略，建立一个辅酶循环再生和6-氰基-(5R)-羟基-3-羰基己酸叔丁酯还原相匹配的全新生物催化体系，实现阿托伐他汀钙手性侧链合成前体6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的原位生物合成。通过表达条件和反应条件的优化，在5％二甲基亚砜助溶剂、反应液pH7.0、20℃、葡萄糖：底物＝1.2：1的条件下，原位生物合成6-氰基-(3R,5R)-二羟基己酸叔丁酯的底物浓度可达35g/L，同时完全去除了外源性辅酶的添加，应用前景广阔。

主权项

一种制备6‑氰基‑(3R,5R)‑二羟基己酸叔丁酯的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向重组大肠杆菌发酵液中加入底物6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯、助溶剂二甲基亚砜、共底物葡萄糖，构建原位生物合成体系；所述发酵菌体为含重组共表达质粒的大肠杆菌工程菌；底物浓度为1～55g/L，优选35g/L；助溶剂二甲基亚砜的体积分数为0％‑10％，优选5％，共底物葡萄糖与底物6‑氰基‑(5R)‑羟基‑3‑羰基己酸叔丁酯的摩尔比为20:1～0.5:1，优选1.2:1；(2)步骤(1)所得反应体系在振荡或搅拌条件完成，反应液pH范围为5.0～9.0，优选7.0，反应温度为15～35℃，优选20℃。