一种糜蛋白酶的制备工艺

摘要

本发明阐述一种糜蛋白酶的制备方法。该制备方法包括以下工艺步骤：(1)原料绞碎，抽提蛋白；(2)分级盐析，得糜蛋白酶粗品；(3)粗品投料，多重结晶；(4)活化；(5)盐析；(6)透析；(7)冻干。本发明建立起一套规模化的生产工艺，具有简单、低成本等优点，制备的糜蛋白酶精品效价高达1200单位/毫克以上，符合《药典》(2010版)要求，具有极大的市场竞争力。

主权项

一种糜蛋白酶的制备方法，其特征在于，各步骤具体为：(1)将胰脏绞碎，用硫酸溶液浸渍2次；取滤液，加固体硫酸铵，使达40％饱和度，过滤，取滤液；加固体硫酸铵，使达70％饱和度；过滤，取沉淀物；加水溶解，调pH值至4.5～5.5，抽滤，得糜蛋白酶粗品；所述胰脏为牛胰脏或猪胰脏；(2)结晶工序糜蛋白酶粗品加水溶解，调pH值至2.5～3.5，静置8～12小时；结晶：将糜蛋白酶粗品溶解液再调pH值至2.0～3.0；加入饱和硫酸铵溶液，调pH值至4.0～6.0，置25±3℃条件下，保温20～48小时，过滤，收集滤饼；滤饼加水溶解，重复上述结晶操作3次，收集滤饼；饱和硫酸铵溶液与粗品溶液的体积比为1～3；(3)活化工序用水溶解上步中所得滤饼，调pH值至7.0～9.0；加磷酸盐缓冲液，调pH值至7.0～9.0；加入活化剂，活化60～80小时；活化剂的比例为3～8mg/100ml料液；所述活化剂为胰蛋白酶；(4)盐析工序活化液调pH值至3.0～5.0，加入固体硫酸铵进行盐析，过滤，收集滤饼；活化液按400～600g/L的比例加入固体硫酸铵进行盐析；(5)透析工序滤饼加水溶解，放透析袋，透析4～6天；滤饼加水溶解的比例为1～1.5ml/g；(6)冻干工序收集、合并透析液，过滤，调节pH值至6.0～6.5，装盘、冻干。