苦瓜蛋白、制备方法及在制备抗肿瘤药物中的应用

摘要

本发明公开一种可抑制癌细胞生长的苦瓜蛋白、制备方法及在制备抗肿瘤药物中的应用，其苦瓜蛋白含有343个氨基酸，氨基酸序列如下：1MMRPSILRSVKSAVSRSITRRGYATEPVPERKVAILGAAGGIGQPLSLLM 51KLNPLVSTLSLYDIAGTPGVAADVSHINSRSQVTGYAGEDELGKALEGAD 101VVIIPAGVPRKPGMTRDDLFNINAGIVKSLATAISKYCPHALVNMISNPV 151NSTVPIAAEVFKKAGTYDEKRLFGVTTLDVVRAKTFYAGKANVPVAEVNV 201PVIGGHAGVTILPLFSQASPQANLDDDVIKALTARTQDGGTEVVTAKAGK 251GSATLSMAYAGAIFADACLKGLNGVPDVVECSYVQSNLIAELPFFASKVR 301IGKNGVEEILGLGSLSDFEKQGLENLKSELKSSIEKGIKFASQ。

主权项

一种苦瓜蛋白的制备方法，所述苦瓜蛋白氨基酸序列如下：1 MMRPSILRSV KSAVSRSITR RGYATEPVPE RKVAILGAAG GIGQPLSLLM51 KLNPLVSTLS LYDIAGTPGV AADVSHINSR SQVTGYAGED ELGKALEGAD101 VVIIPAGVPR KPGMTRDDLF NINAGIVKSL ATAISKYCPH ALVNMISNPV151 NSTVPIAAEV FKKAGTYDEK RLFGVTTLDV VRAKTFYAGK ANVPVAEVNV201 PVIGGHAGVT ILPLFSQASP QANLDDDVIK ALTARTQDGG TEVVTAKAGK251 GSATLSMAYA GAIFADACLK GLNGVPDVVE CSYVQSNLIA ELPFFASKVR301 IGKNGVEEIL GLGSLSDFEK QGLENLKSEL KSSIEKGIKF ASQ；其特征在于按如下步骤进行：a. 苦瓜榨汁后，用5~10倍体积的Tris‑HCl缓冲液于4℃搅拌2~4 h，静置过夜，于10000 rpm离心20 min，取上清液，加入硫酸铵至80%~100%饱和度，于4℃搅拌4~6 h，再于10000 rpm离心20 min，透析48 h后取沉淀冷冻干燥，得苦瓜粗蛋白；b. 用高速逆流色谱法将所得的苦瓜粗蛋白进行分离纯化，所用两相溶剂系统为反胶团溶剂系统，其中固定相为0.05~0.10 mol/L AOT/异辛烷，流动相A是pH6.0~8.0、离子强度为0.02 ~0.06 mol/L KCl的Tris‑HCl缓冲溶液，流动相B是pH9.0~11.0、离子强度为0.2 ~0.6 mol/L KCl的Tris‑HCl缓冲溶液，固定相和流动相在该相中所占的体积比例分别为80%~95%和20%~5%；操作时先将固定相充满高速逆流色谱仪柱子，然后使主机转动并泵入流动相A，待两相溶剂系统平衡后，由进样阀进样，180 min后，将流动相A更换成流动相B，接收目标成分。