鼠伤寒沙门氏菌特异性PCR检测方法

摘要

本发明公开了一种鼠伤寒沙门氏菌特异性PCR检测方法，包括如下步骤：根据鼠伤寒沙门氏菌全基因组序列中保守且特异的STM4493基因序列SEQ ID：1设计扩增引物对序列SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3；提取样品DNA，PCR法扩增；凝胶电泳检测扩增产物，判断样品是否含鼠伤寒沙门氏菌；所述判断具体为：若电泳结果在456bp出现单一扩增条带，则说明样品中含有鼠伤寒沙门氏菌；若未出现相应的扩增条带，则样品中不含鼠伤寒沙门氏菌。采用本发明检测鼠伤寒沙门氏菌，检测时间短，成本低，检测结果特异，结果判定简单。

主权项

一种非诊断和治疗目的的鼠伤寒沙门氏菌特异性PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一，根据鼠伤寒沙门氏菌全基因组DNA序列中保守且特异的STM4493基因序列SEQ ID NO：1设计扩增引物对；所述引物对为：正向引物序列如SEQ ID NO：2所示，反向引物序列如SEQ ID NO：3所示；步骤二，提取样品DNA，PCR法扩增；PCR检测体系具体为：10×PCR反应缓冲液2.5μL，25mmol／L的Mg²⁺2.0μL，2.5mmol／L的dNTP1.0μL，5μM引物对1μL，Taq酶1U，模板溶液0.5～2μL，最后用双蒸水补至25μL；PCR检测体系扩增参数具体为：95℃预变性5min；之后开始扩增循环，每个循环的程序为：95℃变性30s，52℃退火30s，72℃延伸30s；共35个循环；最后72℃延伸10min，降温至16℃，结束；步骤三，凝胶电泳检测扩增产物，判断样品是否含有鼠伤寒沙门氏菌；所述判断具体为：凝胶电泳检测，紫外灯照射下观察扩增产物在456bp位置是否存在单一扩增条带，若存在，则说明样品中含有鼠伤寒沙门氏菌；若没有，则样品中不含鼠伤寒沙门氏菌。