南美白对虾肝胰腺超氧歧化酶和酚氧化酶的荧光定量PCR检测方法

摘要

本发明涉及一种南美白对虾肝胰腺超氧歧化酶和酚氧化酶的荧光定量PCR检测方法。该方法包括以下步骤：（1）南美白对虾肝胰腺样品总RNA的提取；（2）以总RNA为模板反转录合成cDNA；（3）荧光定量PCR扩增SOD和PO特异性序列：选用特异性引物，PCR反应条件为95℃预变性5min，95℃变性30s、60℃退火15s、72℃延伸30s；（4）根据测得的SOD、PO及内参基因β-actin的ct值，计算出SOD和PO的相对含量。本发明不仅可以同时测定多个免疫相关因子，而且引物特异性好，扩增效率高，提高了检测的准确性。

主权项

1.一种南美白对虾肝胰腺超氧歧化酶和酚氧化酶的荧光定量PCR检测方法，其特征在于：包括以下步骤，（1）南美白对虾肝胰腺样品总RNA的提取：取南美白对虾肝胰腺组织，用Trizol裂解液裂解，加入氯仿，离心得到总RNA，用DEPC水溶解RNA后测定RNA浓度和纯度；（2）以总RNA为模板反转录合成cDNA；（3）荧光定量PCR扩增SOD和PO特异性序列：PCR反应条件为95℃预变性5min，95℃变性30s、60℃退火15s、72℃延伸30s；所用特异性引物序列为：（4）根据测得的SOD、PO及内参基因β-actin的ct值，计算出SOD和PO的相对含量。