双质粒哺乳动物表达系统

摘要

反向工程提供了研究RNA病毒感染的病理学的新方法、合成重组病毒和开发疫苗的新的更有效的手段，并且还证明了RNA依赖性RNA聚合酶RDRP系统作为表达系统的通用性和效率。然而，目前使用的方法需要全套复杂的、难以使用的工具。本发明描述了一种基于更简单质粒的哺乳动物的表达系统，其利用RDRP酶活性用于表达重组蛋白或来自病毒小基因组的RNA以及从编码负链RNA病毒的整个基因组的cDNA拯救重组病毒。该系统将可用于表达重组蛋白、包括反义RNA和/或选择性干扰RNA的治疗性RNA分子和核酶。该系统还可用于基因治疗以及制备用于生产新疫苗的重组病毒。

主权项

一种使用非分段负链RNA病毒的RNA依赖性RNA聚合酶用于生产重组蛋白的双质粒系统，无需复制辅助牛痘病毒或外源性RNA聚合酶的帮助，包含：a.一种克隆质粒，包含在两个用于插入可表达DNA片段的多克隆位点处的易于操作的复制子；b.一种辅助质粒，包含分别表达N、P、L蛋白的N、P、L基因。