棉铃虫对Cry1Ac 毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法

摘要

本发明公开了棉铃虫对Cry1Ac毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法。该检测方法共分3个主要步骤，第一步：分别提取棉铃虫样品的基因组DNA；第二步：进行特定钙粘蛋白胞质区片段的PCR扩增；第三步：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳图谱，可以准确鉴定基因型，并以此判断不同种群的抗性基因频率。本发明方法不需饲养试虫，节省劳动力和资源，可以快速、准确检测出棉铃虫的基因型，单个试虫仅需数小时，采集鉴定田间种群的抗性个体频率也只需几周时间，鉴定结果可及时对棉铃虫的有效抗性治理提供正确指导。

主权项

棉铃虫对Cry1Ac毒素非隐性抗性的钙粘蛋白胞质区缺失突变的三种基因型DNA分子检测方法，其特征在于设计特异性引物，采用PCR技术，检测棉铃虫种群内各个体钙粘蛋白胞质区是否存在由于三种不同的插入或缺失导致胞内区32号外显子缺失55个氨基酸的情况；包含以下三个步骤：第一步：提取棉铃虫幼虫或成虫的基因组DNA；第二步：利用SEQ ID NO.1所示的引物A和SEQ ID NO.2所示的引物B，PCR扩增上一步提取的棉铃虫基因组DNA；第三步：将上一步PCR获得产物进行1%琼脂糖凝胶电泳，根据电泳图谱准确鉴定棉铃虫个体其钙粘蛋白胞质区缺失突变及其具体类型，一次性区分出抗性纯合子、抗性杂合子及敏感个体：如果电泳结果只显示2500bp条带，则表明该棉铃虫为钙粘蛋白胞内区基因组DNA插入而导致的mRNA缺失突变的抗性纯合子；如果电泳结果显示2500bp和1000bp两个条带，则该棉铃虫为抗性杂合子；如果电泳结果只显示750bp条带，则表明该棉铃虫为钙粘蛋白胞内区基因组DNA缺失而导致的mRNA第32号外显子缺失突变的抗性纯合子；如果电泳结果显示750bp和1000bp两个条带，则表明该棉铃虫为抗性杂合子；如果电泳结果只显示5000bp条带，则表明该棉铃虫为钙粘蛋白胞内区基因组DNA插入而导致的mRNA缺失突变的抗性纯合子；如果电泳结果显示5000bp和1000bp两个条带，则表明该棉铃虫为抗性杂合子；如果电泳结果只显示1000bp，则表明该棉铃虫为Cry1Ac毒素敏感个体。