3’硫代-2’脱氧核糖-3’硝基吡咯亚磷酰胺单体及其合成方法和应用

摘要

3’硫代-2’脱氧核糖-3’硝基吡咯亚磷酰胺单体及其合成方法和应用，其结构为： 。本发明的最大优点是作为核酸固相合成的基本原料可以很方便地在寡核苷酸片段中引入一个或者多个硫-磷桥键，合成新型的寡核苷酸序列及其探针。

主权项

1.3’硫代-2’脱氧核糖-3’硝基吡咯亚磷酰胺单体的合成方法，其特征在于具体合成步骤为：式2化合物的合成：将19.62mmol的3-硝基吡咯溶解于245mL乙腈中，在氮气气氛搅拌下加入27.5mmol的氢化钠，当反应液变成清晰时，加入式1化合物：1-氯-2-脱氧-3’,5’-二-O-甲苯酰基-α-D-呋喃核糖19.62mmol；将上述混合物搅拌1小时，过滤，固体物用乙腈洗涤，滤液蒸发至干，然后经硅胶柱色谱纯化，正己烷-丙酮作为洗提液，最后得到白色固体式2化合物；式3化合物的合成：将12.92mmol的式2化合物放入溶解于甲醇的浓氨水溶液的压力容器中，55℃过夜，氨水和甲醇通过真空蒸发清除，固体物经硅胶柱色谱纯化分离，正己烷-丙酮作为洗提液，得到白色固体式3化合物3；式4化合物的合成：5.80mmol的式3化合物和5.92mmol的氯化对甲氧基三苯甲烷一同溶解在12mL吡啶中，室温放置1小时，然后不断加入氯化对甲氧基三苯甲烷，直到反应完全，然后将反应液倒入水中，产物用乙醚萃取，并用水洗涤3次，硫酸钠干燥，并用硅胶柱色谱纯化分离，正己烷-丙酮作为洗提液，得到白色泡沫式4化合物4；4.71mmol的式4化合物和65.5mmol的硫代苯甲酸铯，溶于16.35mL无水DMF中，加热到110℃反应5小时，反应完成后，溶剂真空脱出，用200毫升乙酸乙酯悬浮残余物，并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，有机相用硫酸镁干燥，并在减压下蒸发溶剂得到浓缩物；2.67mmol硫代苯甲酸铯和0.77mmol的18-冠醚-6悬浮，在真空脱气、搅拌下溶于5毫升无水乙腈中，将浓缩物分批加入到上述乙腈溶液中搅拌反应2小时，产物冷着至室温后转移到分液漏斗中，用20mL体积比1:1的乙酸乙酯和水萃取，有机相用硫酸钠干燥，过滤，并在减压下蒸发溶剂得到式5化合物；3.04mmol式5化合物在搅拌，同时伴随氩气鼓泡的作用下加入到400毫升乙醇和18.7mL,187mmol的NaOH混合溶液中室温反应1小时，然后将800mL，1M KH₂PO₄加入到反应液，沉淀物通过过滤、蒸馏水洗涤，并经用P₂O₅干燥48小时，得到式6化合物；1.28mmol的式6化合物溶解在40毫升四氢呋喃、30mL甲醇和10mL水的溶剂中，在氩气保护下用冰的盐和甲醇冷着液冷至-10℃，加入脱气的0.5M,10mL氢氧化钠溶液，在0℃下搅拌10分钟。反应产物经减压浓缩至5毫升，加200毫升乙酸乙酯，用10%碳酸钠水溶液萃取3次，有机相用硫酸钠干燥，过滤，真空干燥得到泡沫状固体，20毫升乙酸乙酯溶解上述泡沫状固体，并在搅拌下加入到250毫升正己烷中，放置于冷冻柜中冷至-78℃，沉淀物过滤分离，并在真空下干燥，得到式7化合物；反应式如下所示：