基于固相合成的多肽的切割法

摘要

本发明涉及生物化学与分子生物学领域，为基于固相合成的多肽的切割法，其步骤包括：⑴配制三种浓度不同切割液；⑵切割液的选用：对多肽序列中氨基酸的不同选用不同的切割液；⑶切割反应时间及温度控制，切割反应小时为2小时～2小时45分钟；切割温度控制在≤25℃；⑷切割步骤：①将所需切割的多肽树脂倒入离心管，根据肽序中氨基酸的不同选用切割液；②按步骤⑶的要求进行切割反应；③切割反应后将树脂与多肽从砂芯漏斗中分离出来；④倒入冷乙醚析出多肽，离心、沉淀，用乙醚清洗；⑤去处乙醚，获得切割下的多肽。本发明的切割法对环境友好、能减少对操作人员的危害，降低了成本，提高了多肽切割的效率。

主权项

一种基于固相合成的多肽的切割法，所述的多肽为基于BOC法或FMOC法合成的多肽，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制切割液首先，配制三种浓度不同的切割液：切割液I：采用TFA、对甲酚、乙二硫醇、H2O、苯甲硫醚进行配制，它们的配比为16.5:1:1:1:0.5，配制后切割液中TFA的浓度为82.5%；切割液II：采用TFA、H2O、苯酚、苯甲硫醚、EDT进行配制，它们的配比为17.5:1:0.5:0.5:0.5，配制后切割液中TFA的浓度为87.5%； 切割液III：采用TFA、三异丙基硅烷、H2O进行配制，它们的配比为38:1:1，配制后切割液中TFA的浓度为95%；配制切割液时应严格按照比例进行配制：先倒入一半的TFA，加入各类添加剂后再倒另一半的TFA；（2）切割液的选用切割液的选用标准为：①肽序中Arg﹥1的选用切割液I；②肽序中含有1个Arg的选用切割液II；③肽序中无Arg的选用切割液III；④肽序中含1个色氨酸，1g树脂加0.1ml乙二硫醇、0.2ml对甲酚；肽序中含两个色氨酸，加双倍即0.2ml乙二硫醇、0.4ml对甲酚；其他范围依此类推；⑤肽序中含有Met、Cys的，加乙二硫醇；（3）切割反应时间及温度控制① 20肽以下有色氨酸的切割反应时间为2个小时，无色氨酸的切割反应时间为2小时30分钟；20肽以上有色氨酸的切割反应时间为2小时10分钟，无色氨酸的切割反应时间为2小时45分钟；② 切割温度控制在≤25℃；（4）具体切割步骤①将所需切割的多肽树脂倒入离心管，根据肽序中氨基酸的不同选用切割液，倒入切割液的量应保证多肽树脂浮于离心管内；②旋紧离心管的盖子并将管内溶液摇匀后倾斜放置在低速振荡器中，按步骤（3）所述的切割反应时间及温度控制进行切割反应；③待切割反应完全后将树脂与多肽通过负压作用从砂芯漏斗中分离出来；④在分离后得到的溶液中倒入冷乙醚使多肽析出，用离心机对析出的多肽进行离心，使多肽得以沉淀；然后用乙醚清洗多肽2～3遍以洗掉切割液得到较纯净的多肽；⑤将步骤（4）④获得的多肽用吹风机将多肽表面的乙醚吹除，再将多肽放入干燥器用油泵抽干乙醚，即可获得切割下的多肽。