一种斑点叉尾鮰精子超低温冷冻保存方法

摘要

本发明公开了一种斑点叉尾鮰精子超低温冷冻保存方法。包含以下步骤：将精巢剪碎，加入2～3倍体积4℃预冷的稀释液后混合，过滤，去除块状组织；对斑点叉尾鮰精子质量进行活力及浓度测定，取活力＞60%以上的雄鱼精子入库保存，调整其浓度至2×10⁹个/毫升；向精子悬液中加入1倍精子悬液体积的20%浓度的甲醇溶液，使精子悬液中甲醇的终浓度为10%，轻轻混匀后分装于2mL的冻存管中；采用程序降温仪对分装的精子悬液进行冷冻保存，从4℃程序降温至-80℃（降温速度为5℃/min），保持该温度5min，然后将其转移至液氮中长期保存。采用本方法所保存的斑点叉尾鮰精子复苏后活力较高，可以满足鱼类低温种质库构建的需要。

主权项

一种斑点叉尾鮰精子超低温冷冻保存方法，其特征在于包含以下步骤：（1）选择性成熟的雄性斑点叉尾鮰，解剖后取其精巢至预冷的干燥器皿中；（2）将精巢剪碎，加入4℃预冷的稀释液后混合，过滤，去除块状组织；（3）取少许精子加去离子水激活20～30s后，于200倍显微镜下观察精子活力；取活力＞60%以上的精子悬液于血球计数板上对其进行计数，调整精子悬液浓度至1.5×10⁹个/毫升～2×10⁹个/毫升；（4）向精子悬液中加入1倍精子悬液体积的20%浓度甲醇溶液，使精子悬液中的甲醇终浓度为10%，轻轻混匀后分装于2mL的冻存管中；（5）采用程序降温仪对分装的精子悬液进行冷冻保存，从4℃程序降温至‑80℃，保持该温度5min，然后将其转移至液氮中长期保存。