一种使用多内参基因组合研究胡杨基因的方法

摘要

本发明公开了一种使用多内参基因组合研究胡杨基因的方法，包括如下步骤：（1）提取胡杨的总RNA，反转录为cDNA，作为PCR的模板；（2）使用大于等于9个内参基因，设计特异性引物在实时荧光定量PCR仪上选择SYBR Green法进行反应，得到CT值；（3）通过公式和geNorm软件的PV值计算功能，以0.15为阈值确定内参基因的数目；（4）根据所需数目选择内参基因，和目的基因一起进行qRT-PCR反应，将得到的CT值通过geNorm软件，计算得到目的基因在每个处理下用多内参基因组合得到相对表达量的变化数据。本发明所述方法与传统的单一内参基因方法相比，能够得到更为可靠的结论。

主权项

1.一种使用多内参基因组合研究胡杨基因的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）对胡杨进行抗逆胁迫处理，并分别提取胡杨在每个处理下的总RNA，反转录为cDNA，作为PCR的模板；（2）使用多个胡杨常用的内参基因，所述内参基因数量大于等于9，设计特异性引物在实时荧光定量PCR仪上选择SYBR Green法进行反应，得到CT值；（3）通过geNorm软件的PV值计算功能，以0.15为阈值确定所选择的实验条件下需要的内参基因的数目n；（4）根据所需数目选择内参基因，将选择的n个内参基因和目的基因一起进行qRT-PCR反应，将得到的CT值通过geNorm软件，得到目的基因在每个处理下相对表达量的变化数据，采用以下公式计算：$\mathrm{ratio}=\frac{{\left(E_{t\arg \mathrm{etgene}}\right)}^{{\mathrm{\Delta CT}}_{{t\arg \mathrm{etgene}}^{(\min -\mathrm{sample})}}}}{\mathrm{NormalizationFactor}}\to \mathrm{ratio}=\frac{{\left(E_t\right)}^{{\mathrm{\Delta CT}}_t}}{\mathrm{NF}}$