一种用于中药批次一致性的判断方法

摘要

本发明公开了一种用于中药各批次样本一致性的判断方法，在指纹图谱相似度分析的基础上，通过建立参考图谱，并计算各批次的中药样品的HPLC指纹图谱与参考图谱的马氏距离，然后将马氏距离转化为F检验，从而判断不同批次的中药样品的HPLC指纹图谱与参考图谱之间在一定概率水平下是否有显著差异；对于马氏距离判定为有显著差异的批次样品，采用t检验方法可以判定这些批次样品HPLC指纹图谱中哪些色谱峰对应成分含量是否有显著性差异。本发明的方法基于色谱指纹图谱，简便、易行、实用，能够从概率的角度通过判断中药各批次样品指纹图谱的差异来实现对各批次样品一致性的判断，为中药批次一致性的判断提供了方法依据。

主权项

1.一种用于中药各批次样本一致性的判断方法，其特征在于：步骤如下：（1）择取待判断的多个不同批次的中药样品，研磨后，采用适合提取该中药有效成分的溶剂提取，获得提取液；（2）采用高效液相色谱仪在适合该中药的检测波长处采集上述不同批次的中药样品的提取液的原始高效液相色谱指纹图谱；（3）将上述所得的HPLC指纹图谱进行方法学验证，使所测定的HPLC指纹图谱符合指纹图谱技术规范要求；然后计算各批次的中药样品的HPLC指纹图谱的平均图谱作为对照图谱；分别计算各批次的中药样品的HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度；若相似度r大于等于0.900，则保留，若r<0.900，则将其剔除，然后重新计算剩余批次的中药样品的对照图谱，及剩余各批次的中药样品的HPLC指纹图谱与剩余批次的中药样品的对照图谱的相似度，然后再采用与上述相同的标准考察相似度；重复该过程，直到其符合要求；（4）从上述选择后剩余的批次中选择有效成分含量高的样品的HPLC指纹图谱作为参考，选择与参考样品的HPLC指纹图谱欧氏距离最近的多个批次的中药样品，然后与参考样品构建参考类别，并计算参考类别样品的平均指纹图谱，即参考图谱；（5）基于上述参考类别，计算各批次的中药样品的HPLC指纹图谱与参考图谱的马氏距离，然后将马氏距离转化为F检验，从而判断不同批次的中药样品的HPLC指纹图谱与参考图谱之间在一定概率水平下是否有显著差异；（6）找出马氏距离判定为有显著性差异的那些批次的中药样品，采用t检验将这些批次的中药样品的HPLC指纹图谱的共有峰与参考类别各批次的中药样品的HPLC指纹图谱的共有峰进行检验，判断共有峰中各色谱峰面积在一定概率水平下是否有显著性差异；判断为有显著性差异的色谱峰，表明该批次的中药样品中，在该色谱峰所表示的有效成分含量上明显低于或高于参考类别的中药样品的相应成分的平均含量；在t检验过程中，需要将色谱峰面积按式（1）进行转化，$z_i=\frac{x_i-{\bar{x}}_i}{S_i}---\left(1\right)$式（1）中，x_i是指某个批次样品HPLC指纹图谱色谱峰i的峰面积；和S_i分别为参考类别中各批次样品HPLC指纹图谱色谱峰i的峰面积平均值及标准偏差；将z_i值按式（2）计算t_i：t_i＝z_i[n/(n+1)]^1/2（2）式（2）中n表示参考类别样品数量；t_i与学生t分布的关键值t_crit进行比较，以确定x_i和是否有显著性差异。