一种用于增加显色持续时间的ELISA酶免显色剂及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种用于增加显色持续时间的ELISA酶免显色剂及其制备方法和应用。与现有技术相比，通过本发明方法制备得到的显色剂，在终止后120分钟内，可以维持接近恒定的显色状态，使得显色终止后维持相当程度的稳态，从而增加OD值测定的稳定性、准确性和精密性，有效降低显色过程不稳定对ELISA测试结果准确性的不利影响。

主权项

一种用于增加显色持续时间的ELISA酶免显色剂，其特征在于按照以下方法制备：（1）配制酸性缓冲溶液，pH3.6‑5.8；（2）将配制好的酸性缓冲溶液，置于冰浴中，静置直至体系温度达到1‑10℃；（3）将冷却后的酸性缓冲溶液移至完全避光空间，取3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺（TMB）、4‑氯‑1萘酚（4C1N）或氯化硝基四氮唑蓝（NBT）作为底物，先溶解于有机溶剂中，待溶解完全后，加入到预先冷却的酸性缓冲溶液中，冰浴；（4）向步骤（3）得到的溶液中加入占所配制的ELISA酶免显色剂总体积的1/40‑1/20的30%的双氧水溶液，充分搅拌混匀后补加配制的酸性缓冲溶液定容，使得3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺（TMB）、4‑氯‑1萘酚（4C1N）或氯化硝基四氮唑蓝（NBT）的最终浓度为0.1g/L‑20g/L；（5）将步骤（4）配制好的底物溶液转移到水浴中温浴，温度为30‑40℃，温浴时间为1‑48小时；（6）在温浴过程中，加入还原剂，使其终浓度为0.05‑15g/L；（7）待还原剂充分溶解之后取出溶液，储存于4℃，即得。