两酶一步法制备医药中间体D-7-ACA的工艺

摘要

本发明公开了一种两酶一步法制备医药中间体D-7-ACA的工艺，以头孢菌素C钠盐浓缩液为底物，采用固定化CPC酰化酶和固定化去乙酰基酯酶，将这两种酶载体按一定的比例混合使头孢菌素C提取液直接转化为D-7-ACA。本发明简化了工艺路线，提高了头孢菌素C发酵组分的利用率，缩短了生产周期，避免了三酶两步法中液氧的使用，提高了生产安全性，且整个过程均采用酶法生产工艺，具有条件温和、设备简单、无污染、收率高、副产物少、成本低等优点，有利于我国绿色制药工业的发展，是一条可持续的工艺路线。

主权项

两酶一步法制备医药中间体D‑7‑ACA的工艺，其特征在于：以头孢菌素C钠盐浓缩液为底物，采用固定化CPC酰化酶和固定化去乙酰基酯酶组合一步酶法催化制备D‑7‑ACA，具体步骤包括：（1）将底物头孢菌素C钠盐浓缩液稀释至28000～32000u/mL，用质量分数为5%的氨水调节pH值至6.5～7.5，加入到装有固定化CPC酰化酶和固定化去乙酰基酯酶的酶裂解罐中，在20～22℃下，由质量分数为4.5%～5.5%的氨水通过酶裂解罐调节裂解液的pH值为8.2～8.3，反应结束，得到最终裂解液；所述头孢菌素C钠盐稀释液总单位与固定化CPC酰化酶酶活总单位的比值为4000～5000，所述头孢菌素C钠盐稀释液总单位与固定化去乙酰基酯酶酶活总单位的比值为4000～5000；（2）将步骤（1）所得的最终裂解液转移至结晶罐中，降温至0～10℃，滴加质量分数为10%～20%的盐酸溶液调节pH值为3.0～5.0，控温养晶，过滤，甲醇洗涤，真空干燥即得产品；所述固定化CPC酰化酶是采用LKZ118酶载体树脂固定CPC酰化酶；所述固定化CPC酰化酶的具体制备方法如下：称取100gLKZ118载体树脂，200mL浓度为1moL/L、pH为8.0的磷酸缓冲溶液，加入30000u的CPC酰化酶，在25℃的环境中震荡48小时，清洗，抽干，得固定化CPC酰化酶。