通过融合蛋白的自我蛋白剪切制备重组蛋白

摘要

本发明涉及一种使用包含有感兴趣的多肽且N端为具有自我蛋白水解功能的多肽的融合多肽来制备具有同源N端的感兴趣的异源多肽的方法，这种方法包括以下三个步骤：a)使用亲和色谱体系将融合多肽以可熔的、自我蛋白水解功能失活的形态固定起来，b)再折叠融合多肽，以便激活融合多肽的自我蛋白水解功能并使感兴趣的异源多肽剪切，c)最后洗脱感兴趣的异源多肽，上述三个步骤都在亲和色谱体系中进行。

主权项

一种使用包含有所需多肽和连接在所需多肽N端的，具有自我蛋白水解功能的多肽的融合多肽制备具有同源N端的异源所需多肽的方法，该方法包括以下步骤：a)使用亲和色谱体系将融合多肽以可溶的、自我蛋白水解功能失活的形态固定，b)再折叠融合多肽，以便激活融合多肽的自我蛋白水解功能并使所需的异源多肽剪切，c)随后洗脱所需的异源多肽，其中所述的步骤都在一个亲和色谱体系中进行，其中所述具有蛋白水解功能的多肽是CSFV的自我蛋白酶N^pro或其衍生物，所述CSFV的自我蛋白酶N^pro或其衍生物的氨基酸序列如下所示： SEQ ID NO1： (1)‑MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGRGDIRTT LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDEAQFCEVTKRIGR VTGSDGKLYHIYVCVDGCILLKLAKRGTPRTLKWIRNFTNCPLWVTSC‑(168)， SEQ ID NO2： (1)‑MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGRGDIRTT LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDEAQFEEVTKRIGR VTGSDGKLYHIYVEVDGEILLKLAKRGTPRTLKWIRNFTNCPLWVTSC‑(168)， SEQ ID NO3： (1)‑MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGEDDIETT LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDEAQFEEVTKRIGR VTGSDGKLYHIYVEVDGEILLKQAKRGTPRTLKWIRNFTNCPLWVTSC‑(168)， SEQ ID NO 4： (1)‑MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGRGDIRTT LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDETQFEETTKRIGRV TGSDGKLYHIYVEVDGEILLKLAKRGTPRTLKWTRNTTNCPLWVTSC‑(168)， 或 SEQ ID NO 5： (1)‑MELNHFELLYKTSKQKPVGVEEPVYDTAGRPLFGNPSEVHPQSTLKLPHDRGEDDIETT LRDLPRKGDCRSGNHLGPVSGIYIKPGPVYYQDYTGPVYHRAPLEFFDETQFEETTKRIGRV TGSDGKLYHIYVEVDGEILLKQAKRGTPRTLKWTRNTTNCPLWVTSC‑(168)。