一种利拉鲁肽生物学活性的检测方法

摘要

本发明以细胞内3’,5’-环腺苷酸（cAMP）水平的变化作为检测指标，采用cAMP依赖型蛋白激酶A活性分析法测定利拉鲁肽生物学活性。通过培养大鼠胰岛瘤细胞RIN-m5F，分别加入稀释后的利拉鲁肽对照品溶液和供试品溶液，用试剂盒检测刺激后细胞内cAMP水平变化，用多功能酶标仪的超灵敏化学发光检测模块读取相对化学发光单位（RLU），然后利用统计软件拟合实验数据，通过公式计算供试品的生物学活性。该方法能简便、快速、准确地检测利拉鲁肽生物学活性的变化，其准确性和重复性符合生物制品生物学活性测定方法的要求。

主权项

1.一种利拉鲁肽生物学活性的检测方法，所述方法包括如下步骤：（1）分别制备利拉鲁肽对照品溶液和供试品溶液，设置稀释浓度梯度；（2）培养大鼠胰岛瘤细胞RIN-m5F后，加入步骤（1）中制备的对照品及供试品溶液刺激细胞；（3）用cAMP依赖型蛋白激酶A活性分析法试剂盒检测利拉鲁肽刺激后细胞内cAMP水平变化，用酶标仪的化学发光检测模块读取相对化学发光单位（RLU）；（4）以稀释倍数或药物浓度为横坐标，以相对化学发光单位为纵坐标，利用统计软件拟合实验数据，得到利拉鲁肽的剂量效应曲线，计算出供试品和对照品的半效稀释倍数，按照以下公式计算供试品的生物学活性：供试品生物学活性$(U/\mathrm{ml})=\mathrm{Pr}\times \frac{\mathrm{Ds}\times \mathrm{Es}}{\mathrm{Dr}\times \mathrm{Er}}$式中Pr为对照品生物学活性，单位为U/ml；Ds为供试品预稀释倍数；Dr为对照品预稀释倍数；Es为供试品相当于对照品半效量的稀释倍数；Er为对照品半效量的稀释倍数。