一种尖孢镰刀菌芝麻专化型致病力的鉴定方法

摘要

本发明涉及一种尖孢镰刀菌芝麻专化型菌株对寄主芝麻致病力的鉴定方法，通过以下步骤实现：(1)种子预处理；(2)种子接菌培养：取分生孢子悬浮液，倒入2倍体积的无菌蛭石中混合拌匀，然后按1∶3的体积比例将拌有病原菌的蛭石与无菌土混匀，分装，将步骤(1)已露白的无菌芝麻种子播种在纸钵中，每钵均匀摆放10粒，每个品种种植3个重复，用拌菌的混合土壤轻覆种子表面，放至人工气候箱，25℃，12h/天光暗交替培养，湿度保持在80％左右；以相同体积无菌水为对照，其他培养条件相同；(3)进行致病性鉴定。本发明的方法简便易行，病原菌致病性表现稳定，结果可靠，重复性好，可准确地反映尖孢镰刀菌芝麻专化型菌株对芝麻幼苗有无致病力及其致病强度。

主权项

一种尖孢镰刀菌芝麻专化型致病力的鉴定方法，其特征在于：通过以下步骤实现：（1）种子预处理：选取分别具有抗病和感病的2类芝麻品种的健康饱满种子，清水冲洗后，在超净工作台上，先用70%酒精处理30s，无菌水冲洗1次；然后用3%次氯酸钠处理15min，用无菌水冲洗3‑5次，之后在120r/min，25℃条件下振荡过夜，以催芽使种子露白；（2）种子接菌培养：取分生孢子悬浮液，倒入2倍体积的无菌蛭石中混合拌匀，然后按1：3的体积比例将拌有病原菌的蛭石与无菌土混匀，分装，将步骤（1）已露白的无菌芝麻种子播种在纸钵中，每钵均匀摆放10粒，每个品种种植3个重复，用拌菌的混合土壤轻覆种子表面，放至人工气候箱，25℃，12h/天光暗交替培养，湿度保持在70—90%；（3）进行致病性鉴定；其中步骤（2）分生孢子悬浮液制备方法为：取出保存的尖孢镰刀菌芝麻专化型菌株接种到PDB液体培养基中，在160r/min，28℃条件下摇菌3d，用两层无菌纱布过滤，制备出尖孢镰刀菌分生孢子悬浮液，用无菌水稀释配制成浓度为1×10⁶个/ml的分生孢子悬浮液，以备接种。