小贯小绿叶蝉成虫总RNA的提取方法

摘要

本发明提供一种小贯小绿叶蝉成虫总RNA的提取方法，包括以下步骤：步骤1、将小贯小绿叶蝉成虫热激处理置于液氮中；步骤2、取出离心管加入总RNA提取液RNAisoPlus，匀浆；步骤3、将匀浆样品室温放置，离心；步骤4、吸取上清液，移入另一支离心管中；步骤5、向上清液中加入氯仿，室温静置、离心；步骤6、取出离心管，吸取上清液转入第三支离心管中，加入的异丙醇，静置、离心；步骤7、小心弃上清，加入乙醇，洗涤后离心，弃去乙醇，干燥，加入适量的RNase-free水得到高纯度的总RNA。本发明的提取方法简单有效，解决总RNA在提取过程中容易降解以及不容易高纯度提取总RNA的问题。

主权项

小贯小绿叶蝉成虫总RNA的提取方法，其特征在于包括以下步骤：步骤1、收集小贯小绿叶蝉成虫于离心管中，将小贯小绿叶蝉成虫热激处理，使得小贯小绿叶蝉成虫热激昏迷，然后将所述离心管立即置于液氮中；步骤2、从液氮中取出离心管并马上加入总RNA提取液RNAiso Plus，用塑料研磨棒充分匀浆后加入总RNA提取液RNAiso Plus至足量，然后用移液器对浆液吹打数次；步骤3、将盛有足量总RNA提取液RNAiso Plus的匀浆样品室温放置5min，12000g，4℃离心5min；步骤4、小心吸取上清液，将上清液移入另一支离心管中；步骤5、向上清液中加入总RNA提取液的1/5体积的氯仿，盖紧离心管，剧烈震荡，待溶液充分乳化后，室温静置5min，12000g，4℃离心15 min；步骤6、从离心机中取出离心管，吸取上清液转入第三支离心管中，向第三支离心管中加入与上清液等体积的异丙醇，上下颠倒试管，充分混匀，在15‑30℃的环境中静置10min，12000g，4℃离心10min，离心后试管底部出现沉淀；步骤7、小心弃上清，慢慢沿离心管壁加入浓度为75%的乙醇，轻轻上下颠倒离心管，洗涤离心管壁，12000g，4℃离心5 min后弃去乙醇，室温干燥2‑5 min，然后加入适量的RNase‑free水来溶解沉淀，得到高纯度的总RNA。