水牛卵泡液多肽组的制备和质谱分析方法

摘要

本发明公开了一种水牛卵泡液多肽组的制备和质谱分析方法，先通过合理浓度的乙腈沉淀水牛卵泡液中的高丰度蛋白质，可有效去除高丰度蛋白质对检测的干扰，再通过不同孔径的超滤管多次过滤、截留不同分子量的多肽，能有效富集多肽组样品；脱盐处理后，用飞行时间质谱仪分析多肽组指纹图谱，在质谱检测时，通过合适的质谱分析条件，能高通量鉴定卵泡液多肽组信息。本发明精确、高效、费用低，实现了对水牛卵泡液中多肽组的高效制备和质谱检测，其检测结果可用于分析成熟卵泡液和未成熟卵泡液中多肽组组分鉴定和差异分析，发明人据此发现了一批与卵母细胞成熟微环境卵泡液的生物标志物。

主权项

一种水牛卵泡液多肽组的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）水牛卵泡液离心去除细胞碎片其他杂质，取上清液400μL，按体积比1:4向上清液中添加无水乙腈，沉淀并离心去除高丰度蛋白质；（2）将步骤（1）所得沉淀并去除高丰度蛋白质后的样品转移至30000道尔顿超滤管上层，低温离心，取超滤管下层溶液；（3）将步骤（2）所得下层溶液转移至10000道尔顿超滤管，低温离心，取超滤管下层溶液。