靶向TLR2的shRNA干扰载体PLK0.1-TLR2-shRNA构建及鉴定

摘要

本发明公开了一种靶向TLR2的shRNA干扰载体PLKO.1-TLR2-shRNA构建及鉴定。根据Gene Bank中TLR2的cDNA序列，参考shRNA设计原则，选择cDNA序列上的四个部位作为目标序列，同时将选中的shRNA中的碱基序列随机打乱设计为阴性对照，对照序列经BLAST检测证实与TLR2mRNA及其他基因编码序列无同源性。shRNA模板中的loop结构选用了TTCAAGAGA以避免形成终止信号，shRNA的转录终止序列采用T6结构。正义链模板的5′端添加了CCGG，与Age I酶切后形成的粘端互补；反义链模板的5′端添加了AATTCAAAAA，与EcoR I酶切后形成的粘端互补。成功构建了靶向TLR2的shRNA干扰载体PLKO.1-TLR2-shRNA，并筛选出最佳抑制效率的干扰载体PLKO.1-TLR2-S3，为进一步研究探讨TLR2参与宿主炎症疾病的发病机制和防治具有重要意义。

主权项

一种重组慢病毒质粒载体，其特征是该载体含有大鼠的TLR2的基因干扰片段。