一种靶向肝脏细胞的运载体及其制备方法

摘要

本发明提供了一种将基因靶向性导入肝脏细胞的运载体及其制备方法，所述运载体是由脂质体和载脂蛋白组成的复合物，其中脂质体为由双十二烷基二甲基溴化铵与二油酰磷脂酰乙醇胺制成，并经二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺修饰的双层包膜的磷脂质小囊，载脂蛋白为ApoE。本发明构建的靶向性基因运载体通过以配体—受体亲和性的富集作用来提高载体的靶向性，提高转染效率和肝细胞内的富集度，具有显著的肝脏细胞靶向性，可以作为各类治疗药剂的人工膜和赋形剂，以增强药物的疗效。

主权项

一种靶向肝脏细胞的运载体的制备方法，其特征是包括以下步骤：1）将双十二烷基二甲基溴化铵和二油酰磷脂酰乙醇胺按照1：0.6‑1.5的质量比溶解在无水乙醇中，于50‑70℃加入水中，分别以150‑200nm、80‑120nm及40‑60nm的聚碳酸酯膜挤压整理，得到粒径80‑110nm的脂质体；水洗除去乙醇后，稀释得到浓度13‑17mg/ml的阳离子脂质体水溶液；2）向阳离子脂质体水溶液中加入二硬脂酰磷脂酰乙醇胺‑聚乙二醇‑马来酰亚胺，加入量4‑10μg/ml，于50‑70℃温育0.8‑1.2h，得到活化的阳离子脂质体；3）按照ApoE蛋白：2‑亚氨基硫烷盐酸盐为1：1.5‑2.5的摩尔比，将ApoE蛋白和2‑亚氨基硫烷盐酸盐的PBS溶液混合，室温反应0.8‑1.2h，得到活化ApoE蛋白；4）将活化的阳离子脂质体与活化ApoE蛋白按照1000‑1200：1的质量比混合，氮气保护下室温反应3‑5h，得到所述靶向肝脏细胞的运载体。