检测甘蔗梢腐病温度敏感型小种gx2的方法

摘要

本发明涉及一种检测甘蔗梢腐病（F.moniliforme）温度敏感型小种gx2的方法，包括引物和探针组合的设计、提取病原真菌DNA、建立qPCR检测的反应体系、qPCR检测的反应程序和定量qPCR检测结果。本发明采用Taqman探针的实时定量PCR检测方法，具有灵敏度高，特异性好，所需要的DNA用量少的特点，可以实现对温度敏感型小种gx2的快速定量检测和小种的准确鉴定，可用于田间对甘蔗梢腐病温度敏感型小种gx2的诊断及检测，检测效率高。

主权项

一种利用分子检测方法检测甘蔗梢腐病（F.moniliforme）温度敏感型小种gx2的引物和探针组合FAM‑gx2，其特征在于所述引物和探针组合为下列6个组合中的1个组合：FAM‑gx2第一组：引物：FAM‑gx2‑F1：5’‑CTGATCCGAGGTCAACATTCAG‑3’FAM‑gx2‑R1：5’‑GCAGCTTCCATTGCGTAGTA‑3’探针：FAM‑gx2‑P1：5’‑CGCGTACCAGTTGCGAGGGTTT‑3’；FAM‑gx2第二组：引物：FAM‑gx2‑F2：5’‑ACTACTACGCAATGGAAGCTG‑3’FAM‑gx2‑R2：5’‑AGCGTCATTTCAACCCTCAA‑3’探针：FAM‑gx2‑P2：5’‑CAGCGAGACCGCCACTAGATTTCG‑3’；FAM‑gx2第三组：引物：FAM‑gx2‑F3：5’‑CGCAATGTGCGTTCAAAGAT‑3’FAM‑gx2‑R3：5’‑ACAACGGATCTCTTGGTTCTG‑3’探针：FAM‑gx2‑P3：5’‑TTTGCTGCGTTCTTCATCGATGC‑3’；FAM‑gx2第四组：引物：FAM‑gx2‑F4：5’‑GTACCAGTTGCGAGGGTTT‑3’FAM‑gx2‑R4：5’‑CCTGTTCGAGCGTCATTTCA‑3’探针：FAM‑gx2‑P4：5’‑CAGCGAGACCGCCACTAGATTTCG‑3’；FAM‑gx2第五组：引物：FAM‑gx2‑F5：5’‑GGGCTTGAGGGTTGAAATGA‑3’FAM‑gx2‑R5：5’‑TCGATGAAGAACGCAGCAA‑3’探针：FAM‑gx2‑P5：5’‑AATCTTTGAACGCACATTGCGCCC‑3’；FAM‑gx2第六组：引物：FAM‑gx2‑F6：5’‑TCATTTCAACCCTCAAGCCC‑3’FAM‑gx2‑R6：5’‑GAGACCGCCACTAGATTTCG‑3’探针：FAM‑gx2‑P6：5’‑CGCCGATCCCCAACACCAAAC‑3’；上述Taqman探针的5’端、3’端分别用FAM报导荧光染料和BHQ‑1淬灭基团标记。