发明名称 |
一种rhNGF成熟肽的制备方法 |
摘要 |
本发明公开了一种rhNGF成熟肽的制备方法。步骤为表达载体及工程菌的构建;包涵体表达,收集菌体;包涵体裂解、洗涤、溶解、复性,得到pro-rhNGF复性液;阳离子交换层析初步纯化pro-rhNGF复性液;疏水作用层析二次纯化pro-rhNGF;胰蛋白酶酶切去除pro-rhNGF前导肽获得rhNGF成熟肽;rhNGF成熟肽的第三次纯化得到纯化的rhNGF成熟肽。本发明的方法可进行产业化生产rhNGF成熟肽,纯度高,得率高。 |
申请公布号 |
CN103880943A |
申请公布日期 |
2014.06.25 |
申请号 |
CN201410024115.4 |
申请日期 |
2014.01.20 |
申请人 |
厦门北大之路生物工程有限公司 |
发明人 |
张文宇;章永垒;陈星;黄奋飞;白羊;阮卡;陈胜亮 |
分类号 |
C07K14/48(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I |
主分类号 |
C07K14/48(2006.01)I |
代理机构 |
厦门市精诚新创知识产权代理有限公司 35218 |
代理人 |
张伟星 |
主权项 |
一种rhNGF成熟肽的制备方法,其特征在于,包括如下步骤,1)表达载体及工程菌的构建:人工合成SEQ ID NO:3序列,NdeI和BamHI双酶切后克隆入pET11a空载体中得到构建好的融合表达载体pET11a‑pro‑hNGF;将所述融合表达载体pET11a‑pro‑hNGF转化到大肠杆菌Rosetta(DE3)得到表达工程菌;2)pro‑rhNGF的包涵体表达,收集菌体;3)pro‑rhNGF的包涵体裂解、洗涤、溶解、复性,得到pro‑rhNGF复性液;4)阳离子交换层析初步纯化pro‑rhNGF;5)疏水作用层析二次纯化pro‑rhNGF;6)胰蛋白酶酶切去除pro‑rhNGF前导肽获得rhNGF成熟肽;7)阳离子交换层析第三次纯化得到rhNGF成熟肽。 |
地址 |
361000 福建省厦门市火炬高新区北大生物园金尚路80号 |