艰难梭菌外毒素A羧基端序列密码子优化基因片段、表达载体构建方法及其表达蛋白的应用

摘要

本发明涉及密码子改造的艰难梭菌外毒素A羧基端基因片段、表达载体构建方法及其在大肠杆菌中的高效表达。该密码子改造后的基因序列既兼顾大肠杆菌密码子使用偏好，又降低了原始基因重复序列对于基因合成和表达的影响。本研究所涉及的高效表达载体由密码子改造后的艰难梭菌外毒素A羧基端基因与原核表达载体pET32b(+)组成，经IPTG诱导后可以高表达出带His标签的融合蛋白。该融合蛋白经凝血酶酶切后可以释放艰难梭菌外毒素A羧基端约872个氨基酸片段。本研究中经密码子改造的艰难梭菌外毒素A羧基端基因片段可以大肠杆菌中高效融合表达，纯化后的蛋白作为抗原可用于制备抗艰难梭菌外毒素A抗体和抗艰难梭菌感染疫苗的制备。

主权项

一种密码子优化的艰难梭菌外毒素A羧基端基因序列，其是将艰难梭菌外毒素A原始序列重复区中保守氨基酸序列(conservative aa sequence，CAS)的密码子优化为大肠杆菌中使用频率高的兼并性密码子，优化后的基因序列可在大肠杆菌中表达，而氨基酸序列不变。