革兰氏阳性细菌核酸提取方法

摘要

本发明公开了一种革兰氏阳性细菌核酸提取方法。本发明提供一种破除革兰氏阳性细菌的细胞壁的试剂，由提取液A和提取液B组成；由提取液A和提取液B组成；所述提取液A按照如下方法制备：将Tris、EDTA、SDS、Tween 80、Triton X-100、Brij 58、3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、十二烷基肌氨酸钠、β-巯基乙醇和水混合，得到提取液A；所述提取液B按照如下方法制备：将水饱和酚、乙醇和吡咯烷酮混合，得到提取液B。本发明的实验证明，本发明提供了一种高效提取革兰氏阳性细菌核酸的方法，操作简单，成本非常低，提取效果好，尤其在提取RNA中效果非常好，已经优于目前被广泛使用的市售试剂盒。

主权项

一种破除革兰氏阳性细菌的细胞壁的方法，包括如下步骤：先将提取液A与革兰氏阳性细菌混匀，再加入提取液B，混合，反应，得到反应液；离心收集上层水相，即得到去除细胞壁革兰氏阳性细菌裂解液；所述提取液A按照如下方法制备：将Tris、EDTA、SDS、Tween 80、Triton X ‑100、Brij 58、3‑[(3‑胆固醇氨丙基)二甲基氨基]‑1‑丙磺酸、十二烷基肌氨酸钠、β‑巯基乙醇和水混合，得到提取液A，所述Tris在所述提取液A中的浓度为5‑20 mM；所述EDTA在所述提取液A中的浓度为5‑20 mM；所述SDS、所述Tween 80、所述Triton X ‑100、所述Brij 58、所述3‑[(3‑胆固醇氨丙基)二甲基氨基]‑1‑丙磺酸、所述十二烷基肌氨酸钠在所述提取液A中的体积百分含量浓度均为0.05%‑0.2%；所述β‑巯基乙醇在所述提取液A中的体积百分含量浓度为0.1‑0.5%；所述提取液B按照如下方法制备：将水饱和酚、乙醇和吡咯烷酮混合，得到提取液B，所述水饱和酚、所述乙醇和所述吡咯烷酮的体积比为（99‑98）:1:1。