玉米内州萎蔫病菌的PCR检测方法及检测用引物

摘要

本发明公开了一种玉米内州萎蔫病菌Clavibacter michiganensis subsp.nebraskensis(Cmn)的PCR检测方法及检测用引物，根据Cmn不同亚种间16S-23S序列差异，设计特异性引物PSM1(5’-cctttccgtcgtcctttc-3’)/CM3(5’-gcatccaccgtttgctct-3’)，建立了Cmn的PCR检测方法。该方法的检测灵敏度为4pg菌体DNA或680CFU目标细菌，进境玉米样品的检测试验表明这种PCR方法可用于进境玉米样品中Cmn的快速检测。

主权项

一种玉米内州萎蔫病菌的PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计引物，该引物的序列为：PSM1：5’‑cctttccgtcgtcctttc‑3’，如SEQ ID NO.1所示；CM3：5’‑gcatccaccgtttgctct‑3’，如SEQ ID NO.2所示；(2)玉米样品中细菌DNA提取：玉米样品混匀后放入PBS缓冲液中，4℃浸泡过夜；过滤，滤液离心弃上清，沉淀用试剂盒提取DNA；(3)采用步骤（1）设计的引物进行PCR检测：所述PCR检测的反应体系为25μL，包括2.5μL10×PCR buffer，2.5μL dNTP，步骤（1）PSM1和CM3引物各1μL、2μL模板DNA、1.5U Taq聚合酶，加水补至25μL；所述PCR检测的反应程序为：94℃预变性3min；然后以94℃30s，63℃30s，72℃30s扩增35个循环；最后72℃延伸5min。