一种检测人鼻粘膜调节性T淋巴细胞的方法

摘要

本发明属于生物技术领域，本发明公开了一种检测人鼻粘膜调节性T淋巴细胞（Treg）的方法，其包括如下步骤：1）鼻粘膜细胞的获取：将鼻粘膜刮匙的勺状末端伸入鼻腔至下鼻甲的中下端，将所述刮匙轻轻按压在粘膜表面，然后向外移动4-5mm，重复此动作2-3次，取出刮匙，可见勺状末端内有白色粘性物，获得鼻粘膜标本；2）单细胞悬液的制备：将所述鼻粘膜标本置于生理盐水中，轻轻吹打，使细胞分散混匀得到单细胞悬液；3）调节性T淋巴细胞检测：采用流式细胞术分析所述单细胞悬液的T淋巴细胞。

主权项

一种检测人鼻粘膜调节性T淋巴细胞的方法，其特征在于，其包括如下步骤：1）鼻粘膜细胞的获取：将鼻粘膜刮匙的勺状末端伸入鼻腔至下鼻甲的中下端，将所述刮匙轻轻按压在粘膜表面，然后向外移动4‑5mm，重复此动作2‑3次，取出刮匙，可见勺状末端内有白色粘性物，获得鼻粘膜标本；2）单细胞悬液的制备：将所述鼻粘膜标本置于生理盐水中，轻轻吹打，使细胞分散混匀得到单细胞悬液；3）调节性T淋巴细胞检测：采用流式细胞术分析所述单细胞悬液的T淋巴细胞所述调节性T淋巴细胞检测步骤包括：1）表面染色：加100ul所述细胞于12×75mm流式管中，并加入细胞表面染色抗体；同型对照管：CD3‑PerCP5ul+CD4‑APC2ul+IgG1‑FITC，试验管：CD3‑PerCP5ul+CD4‑APC2ul+CD25‑FITC，涡旋两管，室温避光；2）洗细胞：加PBS，离心，250g×10分钟，弃上清；3）固定细胞：用残液轻轻重悬细胞，加2ml1×人Foxp3反应缓冲液A，涡旋，室温避光，10分钟；4）洗细胞：加PBS，离心，500g×5分钟，弃上清；5）破膜：用残液轻轻重悬细胞，加0.5ml1×人Foxp3反应缓冲液C的工作液，涡旋，室温避光；6）洗细胞：加PBS，离心，500g×5分钟，弃上清；7）Foxp3染色：同型对照管加入IgG1‑PE5ul；试验管加入Foxp3‑PE5ul，轻摇或涡旋，室温避光，30‑60分钟，重复洗涤步骤7；8）加300ul PBS，立即上机检测。