可裂解连接单元及其合成方法与用途

摘要

本发明公开了一种可裂解连接单元及其合成方法与用途。可裂解连接单元的结构式为：，其中，n为1或2，m为0～20中的任意一个整数，k为1～20中的任意一个整数。该可裂解连接单元可用于DNA合成测序。与现有技术相比，本发明的化合物合成原料简单易得，合成过程均为常规化学反应，易于实现大量合成；该类化合物可与核苷酸和荧光素实现高效率的连接；通过研究该类化合物的裂解性能，发现该类化合物在温和的条件下可以实现高效率的完全裂解，可应用于DNA测序。

主权项

1.一种可裂解连接单元的合成方法，其特征在于，所述可裂解连接单元结构式为： 其中，n为1，m为0～20中的任意一个整数，k为1～20中的任意一个整数； 所述合成方法包括以下合成步骤： a、化合物T-1的合成：以L-谷氨酸为原料，加入盐酸，在冰浴搅拌下滴加亚硝酸钠溶液，滴加完毕后，继续在冰浴下反应3～5h，然后移至室温下过夜；反应结束后，减压蒸去水，加入乙酸乙酯溶解，过滤，滤液用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干溶剂得化合物T-1b、化合物T-2的合成：取化合物T-1,以无水四氢呋喃做溶剂，氮气保护，在冰水浴下缓慢滴加硼烷/二甲硫醚溶液，滴加完毕后，继续在室温下反应4～5h；反应结束后，加入甲醇淬灭反应，旋去溶剂，再加入甲醇，旋干得化合物T-2c、化合物T-3的合成：取化合物T-2，以二氯甲烷做溶剂，加入咪唑，氮气保护下和二甲基叔丁基氯硅烷在室温下反应17～20h；反应结束后，加入二氯甲烷稀释，分别用2mol/L盐酸、水和饱和碳酸氢钠洗涤反应液，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析得化合物T-3纯品d、化合物T-4的合成：以二氯甲烷做溶剂，化合物T-3在氮气保护及冰盐浴下和二异丁基氢化铝反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，加入0.2mol/L HCl淬灭反应，二氯甲烷萃取，有机相用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发除去溶剂得化合物T-4e、化合物T-5的合成：以二氯甲烷做溶剂，化合物T-4在氮气保护和冰盐浴下，加入三乙胺，然后和甲磺酰氯反应30～50min，在40～50℃回流3～5h，反应结束后，二氯甲烷稀释，水洗，无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析得化合物T-5f、化合物T-6的合成：以二氯甲烷做溶剂，化合物T-5在对甲苯磺酸吡啶盐作用下和原料A在室温下反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，旋干溶剂，加入水，用乙酸乙酯萃取，饱和食盐水洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析得到化合物T-6纯品所述原料A的结构式为：其中，m为0～20中的任意一个整数，k为1～20中的任意一个整数；g、化合物T-7的合成：以四氢呋喃做溶剂，在四丁基氟化胺作用下，化合物T-6在室温下脱羟基保护，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，旋干溶剂，柱层析得到化合物T-7h、化合物T-8的合成：把化合物T-7溶于过量的氨水，室温下反应，TLC跟踪至反应完全，反应结束后，加乙醇，减压旋去溶剂，得化合物T-8即所述可裂解连接单元。