几株高产蛋白酶芽孢杆菌株的配伍优化方法

摘要

本发明公开了一种几株高产蛋白酶芽孢杆菌株的配伍优化方法，经过平板培养和试管培养后分别取已经制备好的3种菌液各1ml，13000r/min离心25min，取上清分别以1∶1比例配伍后（200μl+200μl），再与豆粉培养液以1∶4比例混合，同时分别取单独Pc、Pe、Ps菌株上清（400μl）与豆粉培养液以1:4比例混合，置于25℃恒温培养箱，酶解6h，测定氨基酸（AA）的变化。对高产蛋白酶菌株选择性强；Pe、Pc和Ps菌株环境适应性较好，Pe与Ps1∶1配伍后产酶效果最好，有着远大的工业化前景，这将为进一步的研究奠定理论基础；方法科学、时间周期短。

主权项

一种几株高产蛋白酶芽孢杆菌株的配伍优化方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）    平板培养，分别取Pc和Pe株枯草芽孢杆菌及Ps地衣芽孢杆菌保存菌种，划线接种至脱脂奶粉平板培养基，分别于35℃培养48h后观察；（2）    试管接种，取发育健壮、菌落典型的菌株接种10ml种子培养基，170r/min，35℃振荡培养24h，再将菌种液以体积分数1％接种于发酵培养基，170r/min，35℃振荡培养48h，12000r/min离心20min，收集上清液；（3）    取步骤（2）3种菌液各1ml，13000r/min离心25min，取上清分别以1:1比例配伍后，再与豆粉培养液以1:4比例混合，同时分别取单独Pc、Pe、Ps菌株上清与豆粉培养液以1:4比例混合，置于25℃恒温培养箱，酶解6h，测定氨基酸的变化。