基因表达的定量

摘要

本发明涉及测定样品中靶核酸的数量的方法，其中将使用的标准物设计成与目标基因或″靶核酸序列″相比具有一个碱基的差异。使用这种标准物与方法结合来″增加″标准物和测试的核酸样品中的差异，其中利用例如，正好在突变位点进行的碱基延伸反应而容许以相同的效率扩增标准物和靶核酸，从而有助于定量靶核酸。此后使用定量″增加″的标准物和靶核酸样品的方式来确定靶核酸的数量。在优选的实施方案中，该定量方式是质谱法。

主权项

一种定量测定生物样品中对应于几种基因的几种靶核酸序列的绝对量的方法，包括下列步骤： a)通过在样品中将包含对应于几种基因的几种靶核酸序列的生物样品与已知量的几种标准核酸混合来制备样品，其中所述几种标准核酸具有与各自的靶核酸序列相比有一个碱基不同的核苷酸序列；b）扩增步骤a）的样品;c）将在区别位点处的单碱基引物延伸反应,用于增加该几种标准核酸序列和该对应于几种基因的几种靶核酸序列之间在其中每一个标准核酸序列区别于各自的对应于几种基因的靶核酸序列的位点处的质量差异，导致具有不同质量的产物增加，使得可检测到该几种标准物和该对应于几种基因的几种靶核酸序列之间的质量差异；d）利用一次MALDI‑TOF质谱分析检测增加的产物，以得到在一个反应中各个增加的靶标和标准物的峰面积；以及e）通过测量由扩增的靶核酸和其相应的扩增的标准核酸产生的各个峰面积的比率，然后根据最初加至样品中的标准物的量来计算绝对量，从而定量测定初始靶标的量。