一种水中微囊藻毒素的检测方法

摘要

本发明公开了一种水中微囊藻毒素的检测方法。所述方法包括如下步骤：(1)制备连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁颗粒；(2)制备连接有微囊藻毒素分子的拉曼探针，所述拉曼探针是通过银纳米颗粒对小分子的拉曼增强制得的；(3)在所确定的最佳反应条件下绘制微囊藻毒素的标准检测曲线；(4)通过测样品拉曼光谱特定峰的峰强对比标准曲线确定待测样品的浓度。所述检测过程结合了激光拉曼增强和竞争免疫，同时在检测过程中应用了磁分离，与传统的检测方法相比，大大缩短了检测时间。本发明所提供的检测方法还可用于水中其他种类藻毒素分子以及小分子的检测，为水中污染物提供了一条快速、方便的检测途径。

主权项

1.一种水中微囊藻毒素的检测方法，包括如下步骤： （1）将微囊藻毒素的单克隆抗体连接到磁性纳米颗粒上并分散于水或磷酸盐缓冲溶液中，得到连接有所述微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液； （2）将拉曼探针分子吸附于银纳米颗粒上并用二氧化硅进行包覆得到包覆有二氧化硅层的银纳米颗粒，然后将所述微囊藻毒素连接到所述包覆有二氧化硅层的银纳米颗粒上并分散于水或所述磷酸盐缓冲溶液中得到连接有所述微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液； （3）将至少3种不同浓度的所述微囊藻毒素的标准水溶液与所述连接有微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液混合得到孵育液A；将所述孵育液A与所述连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液混合并进行反应得到磁性免疫复合物A；测定所述磁性免疫复合物A的拉曼光谱，得到拉曼光谱的峰强与所述藻毒素的标准水溶液之间的标准曲线； （4）将含有微囊藻毒素的待测水溶液与所述连接有微囊藻毒素的拉曼探针分子溶液混合得到孵育液B，所述待测水溶液与步骤（3）中所述标准水溶液的体积相同；将所述孵育液B与所述连接有微囊藻毒素的单克隆抗体的磁性纳米颗粒溶液混合并进行反应得到磁性免疫复合物B，所述反应时间与步骤（3）中所述反应时间相同；测定所述磁性免疫复合物B的拉曼光谱，然后根据所述拉曼光谱的峰强与所述微囊藻毒素的标准水溶液之间的标准曲线即得待测水溶液中微囊藻毒素的浓度； 所述拉曼探针分子的结构式如式（a）所示，其中，R选自H、NH₂、烷基、烷氧基、COOH或OH， 所述磁性纳米颗粒为氧化铁、金属合金、铁氧体、氧化铬或氮化铁；所述磁性纳米颗粒的粒径为100nm～10μm。