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Método para la generación de una célula hospedadora productora para la obtención de productos génicos recombinantes que comprende los pasos (a) proporcionar un vector diana que comprende (i) un gen informador (RG1) enlazado operativamente a una primera secuencia de control de la expresión que comprende un promotor constitutivo (P1), (ii) un primer gen marcador de selección (SM1) enlazado operativamente a una segunda secuencia de control de la expresión (P2), (iii) un segundo gen marcador de selección no funcional (SM2) sin enlace operativo a una secuencia de control de la expresión, en donde la secuencia (i) está localizada en la posición 5', la secuencia (ii) está localizada entre (i) y (iii) y la secuencia (iii) está localizada en la posición 3'. (iv) un primer y un segundo sitio de reconocimiento para una enzima mediadora de rotura de la doble cadena, en donde el primer sitio de reconocimiento está localizado entre la primera secuencia de control de la expresión (P1) y el primer gen informador (RG1) y el segundo sitio de reconocimiento está localizado entre la secuencia (ii) y la secuencia (iii), (b) introducir el vector diana en una célula hospedadora en condiciones tales que permiten la integración aleatoria del vector diana en el genoma de la célula hospedadora, (c) determinar cuantitativamente el nivel de expresión del gen informador (RG1) y seleccionar una célula hospedadora que tenga integrado de manera estable el vector diana y que exhiba una actividad de transcripción del gen informador (RG1), que es al menos 10 veces mayor comparada con los niveles de expresión medios de la población de clones resultante, (d) proporcionar un vector de intercambio que comprende: (i) un gen de interés (GOI), y~ (ii) un segundo gen marcador de selección inactivo (ΔSM2) enlazado operativamente a una tercera secuencia de control de la expresión (P3), en donde el vector de intercambio comprende una primera secuencia homóloga 5' y una segunda secuencia homóloga 3', que permiten la recombinación con secuencias del vector diana, (e) introducir el vector de intercambio en una célula hospedadora obtenida en el paso (c) en condiciones que permiten una rotura de la doble cadena en el primer y/o segundo sitio de reconocimiento, como se define en (a) (iv) y una integración del vector de intercambio en el genoma de la célula hospedadora por recombinación homóloga mediada por rotura de la doble cadena, con lo cual el segundo gen marcador de selección inactivo (ΔSM2) se activa por integración del vector de intercambio por recombinación homóloga con el vector diana, (f) seleccionar una célula productora que tiene integrado el vector de intercambio por recombinación homóloga con el vector diana integrado, en donde la célula productora expresa el GOI. |
