吡咯并喹啉醌依赖性葡糖脱氢酶的热稳定突变体

摘要

本发明涉及一种PQQ依赖性s-GDH突变蛋白，其特征在于在122位和124位中的至少一个中存在氨基酸赖氨酸，其中这些位置对应于由乙酸钙不动杆菌(A.calcoaceticus)s-GDH野生型序列(SEQ ID NO：2)已知的氨基酸位置。本发明还公开了编码这种突变s-GDH的基因，以及这些s-GDH突变体的不同用途，具体地说是用于测定样品中的葡萄糖浓度的用途。

主权项

一种热稳定性提高的PQQ依赖性s‑GDH突变蛋白，其在SEQ ID NO: 2的基础上将122位和124位中的至少一个取代为赖氨酸。2. 权利要求1的突变体，所述突变体在选自以下的一个或多个位置另外含有一个或多个氨基酸取代：位置16、22、65、76、116、120、127、143、168、169、171、177、224、227、230、231、245、246、255、277、287、294、295、299、302、305、307、308、317、321、323、341、348、349、354、355、364、378、422、425、428和438。3. 权利要求2的突变体，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代为在348位的取代。4. 权利要求2的突变体，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代为在428位的取代。5. 权利要求2的突变体，其中所述一个或多个另外的氨基酸取代为在348位和428位两者的取代。6. 权利要求3的突变体，其中348位的苏氨酸被丙氨酸、甘氨酸或丝氨酸取代。7. 一种分离的多核苷酸，所述多核苷酸编码权利要求1‑6中任一项的s‑GDH突变蛋白。8. 一种包含权利要求7的分离的多核苷酸的表达载体，所述多核苷酸有效连接至能够启动所述多核苷酸在宿主细胞中表达的启动子序列。9. 一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求8的表达载体。10. 一种生产s‑GDH变异体的方法，所述方法包括在适合于生产所述酶变异体的条件下培养权利要求9的宿主细胞。11. 一种使用权利要求1‑6中任一项的s‑GDH突变体检测、测定或测量样品中葡萄糖的方法，所述方法包括使所述样品与所述突变体接触。12. 权利要求11的方法，所述方法的进一步特征在于所述葡萄糖的检测、测定或测量使用传感器或测试条装置进行。13. 一种用于检测或测量样品中的葡萄糖的装置，所述装置包含权利要求1‑6中任一项的s‑GDH突变体和所述测量需要的其它试剂。