一种鮸微卫星分子标记的筛选方法

摘要

本发明涉及一种鮸微卫星分子标记的筛选方法，包括：（1）鮸基因组DNA的提取并稀释备用；（2）设计5’锚定引物及PCR扩增；（3）扩增产物的克隆及测序；（4）序列分析及微卫星特异引物设计；（5）使用上述微卫星特异引物对鮸基因组DNA进行PCR扩增；（6）使用质量浓度6%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测步骤（5）得到的PCR扩增产物；根据扩增产物的不同迁移距离确定每个个体的基因型，共获得9个多态性的微卫星标记，从而获得鮸遗传变异的多态性图谱。本发明操作简单、安全、阳性率高、结果真实可靠，可快速获得鮸遗传变异的多态性图谱，主要应用于鮸遗传变异及遗传多样性分析。

主权项

一种鮸微卫星分子标记，由如下9个多态性微卫星标记组成：Mim11 CATCTAATCT TCCCTTACCT CTGCAGCTGC GTGTGATATC CTTTGGGACAAAAAACGTAG61 TGGGGAGAAA ACTTCAGCTT CAACAGCACT GCTACAGATC CTCACTTTCTAGCTCTTTCC121 AAGGTAACGT ATCTTTCAGC CCAAACACAC ACACGCACTT CAGTCCACTATGACAGCGCT181 CTGTCTACCT GCGTGAGCTT GTGTAAATGT ATCCTAGATG GTGATGAATAGTGGTGAGTG241 AAAGCAGAAT ACT；Mim21 AGAAAGAAGA GTCCGACCAC CAACCGGGTT TTGATCAGCT GTTGTTGGAGTTTGCGCCGG61 AGTGATGTTC CTGCGCTCTT AGCGAGAGGA GAAACAGACG GAGAGAGAGAGAGGGAGAGA121 GACAGAGAGA GAGAGGGAGA GAGAGGAGGT GAAGACGCCG GTTTGTTGTTGTCGCCTTGT181 CCGCTGGACT GACATCGCAT GGGGACATGA ACAGTGTGGA TC；Mim31 GGAAGGACAG GGAGAAAGAA AATATGGAAG GAAGGAAGGA AGGAAGGAAGGAAGGAAGGA61 AGGAAGGAGG GAGGGGAAGA GAGTCACGCT GTGTGGCATT AATCCGACTGACCCGGATTA121 TTTATATCTA ACAGTTATTA ACATTTTATG CCA；Mim41 GTTTGAAAAT GGAGTTGGCT GCGGTGTTTA TATGAGCTGT GGTTGCCTATGAGTGTGTGT61 GTCTGTGTGT GTGTGCGGGT GTTTGGCACC AGACTGGAGG GTTGCTGTGGGTCCACGCTG121 GCGTAGTTGG GGCTGGAA；Mim51 GCAAAGAGAA GAGCCAAAGA AAAAAAAAAA AGAAAGAAGA GTCCGACCACCAACCGGGTT61 TTGATCAGCT GTTGTTGGAG TTTGCGCCGG AGTGATGTTC CTGCGCTCTTAGCGAGAGGA121 GAAACAGACG GAGAGAGAGA GAGGGAGAGA GACAGAGAGA GAGAGGGAGAGAGAGGAGGT181 GAAGACGCCG GTTTGTTGTT GTCGCCTTGT CCGCTGGACT GACATCGCATGGGGACATGA241 ACAGTGTGGA TCCAGCCTCT AACAAACTGT TGACTTTCAA TCAGCGG；Mim61 CAGGTCAGAT GAGTGCAGCG ACGGGCGAGC GAGCAACTGT CTGCATTACAGAGAGAGAGA61 AAAGAGAGCG AGCAATGGAG CATGGAGATG CGTGTGTGTG TGTGTGTGTGTGTGTGACCT121 TGTCTGGCTG TGTGTGCGTG AGCCAGAGAG AGAGACGGCG AGTGTAGCGGGCGAGCGAGC181 GAATAGGAAA GGGGAGCCTT GAAACCGTCC TGACT；Mim71 TCTCGGCAGC CCCTGAATGT AAACAGATTA TTAGATTAGT GGCCATGAGAAGGAGACGAC61 TGAAGAGAGG ACTGTCACTC TGTCTCCTTC CCTCCGTCTC TCTCTCTATCTCTTTTTCTT121 TCTGTCAGTG CTGATGGGGC TGTGTCCTTT TTCTTTGTGA TTTAGCTGGTGCTGGTGAAA181 CCGGAGAAAC TTCTCGCTGG ACCGAGGAGG AGATGGAGGT CGCCAA；Mim81 GTGAGGGGAA TGGCACCAAA CGAGGAGGAG GGGGAGGTGA AGAAGCTGAAATAGGCAGTG61 TGAATCATTG CTGTCCCGTT TCCACATGCT AATAAGAGCT CTGTAACACGGACACACGCA121 CACACACAGG CGCTCACACA CATTCTGACA GCTAGAAAGC CTTGCTGTACAAGCGTTGTC181 TCACTTTGGT GAGAGGGACA TTTATGCACA GAGCTGTCAA TAGGAGGAGGACTTACTTAA241 TAAAGAACAC AAAGAAATTA GTGTAGCTCA CTCTCACACA CACACACACACACACATACA301 TGCACACACA AACACACACA AACAGCCCCC AGCGTTGCTG CTTATTTGCTATTATTGTTTT361 GCCGTGTTGG TGGAG；Mim91 TACAAGCGTT TGTGCTATAT GTAGTGTGTG TGTGTGTGTG CATATATGTGTGGGAGGTGT61 AGAGGAGAGT TTTATCTGTA AAAGGGGGGA AAAAAGACCA CCCAGGAGAGGTGACAGGAG121 AGTAATTCTT ATTCAGAGTA AATTTCTTGA GAGCACCACA CACACCACTACTACCCCACC181 TTC。