与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10

摘要

本发明提供一种与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10，所述人类蛋白NDUFA10的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。其是利用酵母双杂交的方法通过转基因植物中外源蛋白对人的cDNA文库进行筛选，获得与外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白，并通过免疫共沉淀的方法对互作进行阳性验证。本发明可在转基因生物安全评价研究领域用于预测Bt蛋白对人体的潜在风险。

主权项

一种筛选与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10的方法，利用酵母双杂交的方法通过转基因植物中外源Bt蛋白对人的cDNA文库进行筛选，获得与外源蛋白相互作用的人类蛋白，并通过免疫共沉淀的方法对互作进行阳性验证，从而筛选得到与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10，所述人类蛋白NDUFA10的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，其特征在于，包括以下步骤：1）编码外源蛋白Bt的基因的克隆与鉴定：从转基因植物中通过PCR或基因分离的方法获得外源蛋白Bt的基因序列，转化至宿主菌中克隆扩增，再通过PCR、琼脂糖凝胶电泳及序列测定分析鉴定目的片段；2）含有外源目的片段的诱饵质粒载体的构建：回收目的片段，酶切后与载体pGBKT7连接，并转化入大肠杆菌中，筛选阳性克隆，即构建得到可表达BD‑Bait融合蛋白的质粒；3）人cDNA文库的构建；4）可表达AD‑Library/prey融合蛋白的质粒：构建于pGADT7载体上的人cDNA文库，购自Clontech公司；5）用酵母双杂交的方法筛选人的cDNA文库中与外源蛋白相互作用的候选蛋白；6）用免疫共沉淀的方法进一步验证阳性互作蛋白，从而筛得与转基因植物外源Bt蛋白相互作用的人类蛋白NDUFA10。