一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂

摘要

本发明公开了一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂及其制备方法和用途，其特点是该检测试剂为有机硅包裹的纳米金微粒，微粒的粒径为10～150nm，纳米硅涂层为5～100nm，所述的有机硅涂层表面引入胺基、羧基、羟基、氢硫基、环丙烷基和醛基功能基团，功能化的有机硅表面通过化学反应与生物分子如蛋白质、抗体进行标记，形成稳定的共价键连接，并保持被标记分子的生物活性；这种改性的纳米金可以取代传统胶体金用于免疫学领域，制备免疫试剂；用这种改性的纳米胶体可以制备心肌肌钙蛋白I的检测试剂。

主权项

一种心肌肌钙蛋白I的检测试剂，其特征在于该检测试剂含有有机硅包裹的纳米金微粒，该微粒的核心粒径为10～150nm，有机硅表面涂层为5～100nm，所述有机硅表面涂层引入氨基、羧基、羟基、氢硫基、环丙烷基和醛基功能基团，功能化的有机硅表面涂层通过化学反应与生物分子进行标记，形成稳定的共价键连接，并保持被标记分子的生物活性；并按以下工艺步骤及工艺参数制备：（1）有机硅包裹的纳米金微粒的制备及表面功能化将浓度为0.01～4%氯金酸溶液100重量份加热，在100～400rpm搅拌下煮沸10～120分钟，快速加入浓度为2N氨水溶液0.1～5重量份和浓度为1％的柠檬酸钠2～10重量份，高速搅拌至溶液呈现橙红色，冷却后高速离心纯化，获得微粒粒径在10～150nm的胶体金微粒，并将制得的胶体金分装保存；再将上述制得的胶体金溶液100重量份，加入200～500重量份溶剂，在100～400rpm搅拌15～120分钟，用氨水调节溶液pH值至碱性，加入0.1～2重量份1∶1的四乙氧基硅烷和含功能基团的硅烷化试剂的混合溶液，在室温下继续搅拌18～24小时，对产物在2000～10000rpm高速离心纯化，获得有机硅包裹纳米金表面功能化改性的纳米微粒；（2）心肌肌钙蛋白I的检测试剂的制备采用双抗免疫夹心法将上述制得的纳米微粒标记的心肌肌钙蛋白I单克隆检测抗体喷点于玻璃纤维垫片上,另一心肌肌钙蛋白I单克隆捕捉抗体和单克隆检测抗体的二抗喷点于硝酸纤维素膜，形成抗心肌肌钙蛋白I的快速检测试纸条，再将该检测试纸条制成试剂盒。