用于cDNA文库构建筛选的质粒载体及其构建方法与应用

摘要

本发明提供了一种能用于构建cDNA文库筛选的质粒载体及其构建方法与应用，在本发明中，膜蛋白与寄主互作最有效的方法是利用泛素介导的膜蛋白酵母双杂交系统，而构建cDNA文库较为简便快捷的方法是Gateway高效文库构建系统。本发明通过将膜蛋白酵母双杂交系统与Gateway系统相融合，以载体pPR3-N为模板，用酶切连接的方法引入attR1-Cm^r-ccdB-attR2基因，改造成可用Gateway技术高效构建cDNA文库的pPR3-gateway载体质粒，该pPR3-gateway载体用于全长cDNA的定向克隆、文库构建和测序，或者用于酵母双杂交的文库筛选。

主权项

一种能用于构建cDNA文库筛选的质粒载体，其特征在于，由pPR3‑N载体和attR1‑Cm^r‑ccdB‑attR2基因组成，记为pPR3‑gateway载体，其中，所述attR1序列如SEQ ID NO.1所示，所述Cm^r序列如SEQ ID NO.2所示，所述ccdB序列如SEQIDNO.3所示，所述attR2序列如SEQ ID NO.4所示。