牙髓干细胞的规模化生产工艺

摘要

本发明提供一种牙髓干细胞的规模化生产工艺，包括以下步骤：（1）牙髓干细胞的分离提取；（2）牙髓干细胞的二维培养扩增；（3）牙髓干细胞的检测；（4）牙髓干细胞的大规模培养；（5）牙髓干细胞的冷冻保存；（6）牙髓干细胞的长期冷冻保存。本发明提供了一种牙髓干细胞的体外规模化培养扩增方法，建立了高质量高活性牙髓干细胞的长期、标准化、系统化冻存体系，以便为临床及科研提供足够高质量的干细胞资源，成本低廉，应用前景广阔。

主权项

一种牙髓干细胞的规模化生产工艺，包括如下步骤：（1）牙髓干细胞的分离提取：将牙髓组织用胶原酶消化后，在含胎牛血清细胞培养液的培养器皿中，于37℃、5％CO₂条件下培养，3天换液；（2）牙髓干细胞的培养扩增：将步骤（1）培养所得的原代细胞以0.1×10⁵‑1.0×10⁵个细胞/cm²的密度接种于二维培养器皿中，加入新鲜细胞培养液，于37℃、5％CO₂条件下培养，3天换液；（3）牙髓干细胞的检测：进行细胞活性检测、无菌性检测和流式细胞检测；（4）牙髓干细胞的大规模培养：采用转瓶培养或生物反应器培养，将牙髓干细胞接种在转瓶或生物反应器中后，调整溶解氧浓度、pH值、搅拌转速和通气量，根据取样分析细胞计数、存活率、营养成分和代谢物的结果更换培养基，从而达到细胞的高密度大规模培养；（5）牙髓干细胞的冷冻保存:将检测合格的细胞冻存于管内，细胞的详细信息扫描入数据管理系统，自动化系统根据液氮情况自动寻找空缺位置，将细胞冻存于相应的空格中；（6）根据需要，进行牙髓干细胞的长期冷冻保存，保存期间定期从冻存环境中取出细胞进行检测。