一种铁皮石斛种苗高效快繁方法

摘要

本发明公开了一种铁皮石斛种苗高效繁殖的方法。步骤包括a.选用铁皮石斛茎尖或无菌幼苗为外植体，进行拟原球茎的诱导及增殖培养；b.拟原球茎的分化成苗；c.丛生幼苗的生根壮苗培养；d.无菌苗的炼苗及移栽。本发明利用茎尖和无菌幼苗为外植体，避免了仅以茎芽及顶芽为外植体诱导拟原球茎，外植体来源受限的问题，可大量、快速、持续获得成熟的拟原球茎，拟原球茎发生率最高达99％，幼苗分化系数高达50株/0.1g拟原球茎，获取种苗周期仅需4个月，种苗整齐，生根率100％，根长5cm左右且根数多达10条/丛，移栽成活率可高达95％以上等优点，达到缩短种苗周期、提高繁殖系数、种质来源不受局限的目标。可快速生产大批量的种苗，适用于大规模生产。

主权项

一种铁皮石斛种苗快繁方法，其特征在于，它包括如下步骤：(1)拟原球茎诱导及增殖培养选取铁皮石斛的茎尖或无菌幼苗接种于诱导培养基，茎尖或无菌幼苗高为0.5cm～1.5cm；诱导培养基为：1/4MS～1MS培养基+蔗糖20g/L～30g/L+琼脂8g/L～12g/L+TDZ（苯基噻二唑脲）0.5mg/L～4mg/L+NAA（萘乙酸）0.5mg/L～4mg/L+2，4‑D（2，4‑二氯苯氧乙酸）0.5mg/L～2mg/L，进行拟原球茎的诱导及增殖培养，得到拟原球茎；(2)拟原球茎分化培养将上步培养所得拟原球茎转接于分化培养基，分化培养基为：MS培养基+蔗糖20g/L～30g/L+琼脂8g/L～12g/L+NAA0.25mg/L～2mg/L+6‑BA（6‑苄基腺嘌呤）2mg/L～10mg/L，进行分化成苗培养，得到丛生幼苗；(3)丛生幼苗的生根壮苗将上步中分化培养的丛生幼苗分株接种于生根壮苗培养基，生根壮苗培养基为：1/4MS～3/4MS培养基+蔗糖20g/L～30g/L+琼脂8g/L～12g/L+6‑BA0.5mg/L～3mg/L+NAA0.25mg/L～4mg/L+IBA（吲哚丁酸）3mg/L～6mg/L+土豆提取物100g/L～400g/L+活性炭2g/L～5g/L，进行生根壮苗；(4)炼苗移栽自然光下炼苗，炼苗7天～10天，洗净培养基，移栽于水苔、松树皮、蛭石混合的基质上，该基质中松树皮长宽在0.5cm～4cm，蛭石粒径为小于等于4mm，基质分三层，底层为1cm～3cm厚的水苔，中间为松树皮与蛭石按体积比2：1～4：1的比例混合，顶层为3cm～5cm厚的水苔；以喷雾处理维持空气湿度及含水量，维持基质含水量为50%～70%及空气湿度为40%～70%，室内温度控制在25℃±3℃，保持通风透气。