非-FRET肉毒梭菌测定法

摘要

包含人工构建体的组合物，所述构建体具有(a)含报道物的部分，其化学偶联到(b)切割位点。所述切割位点以从所述构建体的剩余部分切割含报道物的部分的方式与研究的物质相互作用。所切割的部分被局部环境破坏或另外降解，并通过降低来自报道物的信号而证实研究的物质的存在。所述研究的物质优选地是肉毒梭菌毒素(BoTN)，所述切割序列是SNARE蛋白的全部或部分。所述可切割的含报道物的部分优选地是黄色荧光蛋白(YFP)、Citrine、Venus或YPet蛋白。

主权项

用于定性和定量检测肉毒梭菌毒素的方法，包括：(i) 提供包含人工构建体和酶的组合物，其中所述构建体具有(a)含报道物的部分和(b)切割位点，其以引起从所述构建体的剩余部分切割含报道物的部分的方式与肉毒梭菌毒素的一部分相互作用，其中所述组合物显示出鉴别基线信号的发射；和其中所述酶促进含报道物的部分降解，切割后至少10倍于切割前；(ii) 获取来自所述基线信号的第一发射测量；(iii) 使所述组合物暴露给肉毒梭菌毒素；和然后(iv) 通过测试所述组合物对基线信号的降低作为以下的指示，获取进一步发射测量：‑ 所述毒素在切割位点切割所述构建体，和‑ 含报道物的部分的降解；(v) 将步骤(ii)的第一发射测量与步骤(iv)的进一步测量进行比较。