一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用

摘要

本发明公开了一种重组猪伪狂犬病毒及其构建方法和应用，该病毒含有由猪细小病毒VP2基因、口蹄疫病毒2A基因和猪圆环病毒Cap基因依次连接构成的外源基因。该方法包括：(1)构建包含PRV全基因组的细菌人工染色体pPRV；(2)将pPRV中的CMV启动子替换为EF1启动子；(3)将Pcmv-V2C-BGH-pA表达框替换pPRV-EF1的gE基因，获得pPRV-V2C-ΔgE；(4)pPRV-V2C-ΔgE与pCAGGS-NLS/Cre两种质粒共转染Vero细胞系，筛选获得删除pHA2质粒的rPRV-V2C-ΔgE。本发明重组病毒同时能免疫猪细小病毒、猪圆环病毒、伪狂犬病毒等引起的三种疾病。

主权项

一种重组猪伪狂犬病毒，其特征在于，该病毒包含Pcmv‑V2C‑BGH‑pA表达框； 其中V2C表示由猪细小病毒VP2基因、口蹄疫病毒2A基因和猪圆环病毒Cap基因依次连接构成的外源基因；Pcmv表示启动子CMV；BGH‑pA表示人β球蛋白基因多聚腺苷酸尾； 该病毒的gE基因被所述外源基因替换；该病毒的TK基因部分缺失； 所述的猪细小病毒VP2基因碱基序列如SEQ ID NO.1所示；所述的口蹄疫病毒2A基因碱基序列如SEQ ID NO.2所示；所述的猪圆环病毒Cap基因碱基序列如SEQ ID NO.3所示； 并通过如下方法制备： （1）将pHA2质粒插入到原始猪伪狂犬病毒的TK基因内，获得rPRV； （2）将rPRV基因组转化大肠杆菌（E.coli）DH10B菌株，获得pPRV； （3）将pPRV的标记基因GFP的CMV启动子更换为EF1启动子，获得pPRV‑EF1； （4）将Pcmv‑V2C‑BGH‑pA表达框替换pPRV‑EF1的gE基因，获得pPRV‑V2C‑ΔgE； （5）pPRV‑V2C‑ΔgE与pCAGGS‑NLS/Cre两种质粒共转染Vero细胞系，筛选获得删除pHA2质粒的rPRV‑V2C‑ΔgE。