一种新的发酵方法

摘要

本发明公开了一种新的发酵方法，该方法主要包括以下步骤：(1)液体种子制备(2)固体平板的制备：在严格厌氧菌的对应的每1000ml液体发酵培养基中，加入18-32g琼脂，灭菌后倒入平板中，利用琼脂对液体的凝固能力，冷却后即可制成含液体培养基成份的固体平板培养基；(3)放大发酵：将步骤(1)中得到的对应的液体种子均匀喷在固体平板表面，然后放置于35℃-37℃恒温发酵室内封闭发酵培养，根据菌种的不同，培养24-72小时；收集菌泥。所述方法成本低、操作简单、后续加工容易，能适用于多数微生物菌种的生产。并可生产出大大突破现有微生物制剂产品含菌浓度上限的产品，可得到达10000亿/克左右菌粉产品。

主权项

一种发酵方法，其特征是，包括以下步骤：（1）种子制备：进行常规的菌种筛选及活化后，取2～3环菌泥接入种子培养基三角瓶中，37℃恒温摇床中速培养24～30h，得种子液；（2）固体平板的制备：在非严格厌氧菌的对应的每1000ml液体发酵培养基中，加入18－32g琼脂，灭菌后倒入平板中，冷却后即可制成含液体培养基成份的固体平板培养基；所述非严格厌氧菌为反硝化假单胞菌，其固体平板培养基的组成为：按1000mL计：葡萄糖4－5g、面粉1.5－2.5g、鱼粉13－17g、硝酸钾4－6g、磷酸氢二钾0.8－1.2g、磷酸二氢钾0.8－1.2g、硫酸镁0.4－0.6g、酵母膏0.15－0.25g、琼脂18－22g；所述非严格厌氧菌为枯草芽孢杆菌，其固体平板培养基的组成为：按1000mL计：废糖蜜18－22mL、面粉1.5－2.5g、鱼粉13－17g、液体蛋白9－11mL、硫酸锰0.8－1.2g、磷酸氢二钾0.8－1.2g、磷酸二氢钾0.8－1.2g、硫酸镁0.4－0.6g、酵母膏0.15－0.25g、琼脂18－22g；所述非严格厌氧菌为嗜酸乳杆菌，其固体平板培养基的组成为：按1000mL计：鱼粉18－22g、葡萄糖18－22g、乳清粉8－12g、琼脂28－32g、磷酸氢二钾1.8－2.2g、硫酸锰：0.2－0.4g、乙酸钠：1.5－2.5g、硫酸镁：0.5－0.7g、酵母膏：1.8－2.2g、吐温801‑2mL；（3）放大发酵：将步骤（1）中得到的对应的液体种子均匀喷在步骤（2）所述固体平板培养基表面，轻轻摇动至种子液铺满所述固体平板培养基表面，然后放置于35℃－37℃恒温发酵室内封闭发酵培养，根据菌种的不同，培养24‑72小时；（4）收集菌泥：放大发酵完后，将平板取出发酵室，然后用灭菌的硬薄片，将平板培养基上的菌泥刮下来，收集，得到所需的菌泥；将菌泥与水按质量比1：0.8－1.2在搅拌混匀后，再按质量比为菌泥：二氧化硅＝1：7.5－8.5逐步添加干燥二氧化硅后，进行吸附干燥，过60目筛，将筛上物进行粉碎后再次过60目筛，得到高浓缩纯菌粉。