以沼渣为原料进行微藻培养的方法

摘要

一种以沼渣为原料进行微藻培养的方法，其特征是它包括如下步骤：（1）用浓度为5mol/L的氢氧化钠溶液调节沼渣pH至10，在25℃下放置12h，放入高压灭菌锅中于115℃下加热60min，冷却后采用真空抽滤收集液体部分作为微藻培养基；（2）微藻培养；所述微藻藻种为小球藻；（3）沼渣营养液培养：将（1）中所得微藻培养基用5mol/L盐酸溶液调节pH至7，进行高压灭菌20min，将藻种经无菌操作接种于灭过菌的微藻培养基中，然后置于转速为180rpm的摇床中震荡培养，培养温度为28℃，光照强度为6000Lux，培养7天。

主权项

一种以沼渣为原料进行微藻培养的方法，其特征是它包括如下步骤：（1）用浓度为5 mol/L的氢氧化钠溶液调节沼渣pH至10，在25℃下放置12 h，放入高压灭菌锅中于115℃下加热60 min，冷却后采用真空抽滤收集液体部分作为微藻培养基；所述沼渣主要由活性污泥和未充分降解的藻渣组成，藻渣中蛋白质含量超过50%，所述藻渣的具体获得方式为：在藻种培养的基础上，将培养后的微藻经离心去除上清液，收集下层湿藻后经高压均质机进行细胞破碎，均质压力为120 MPa，循环处理2次；选择正己烷作为萃取溶剂，将破壁细胞加入单口烧瓶中，按照1 mL/g 破壁细胞的比例加入溶剂，在55℃下磁力加热搅拌装置上浸出1h，结束后对其进行静置分离，收集上层的有机溶剂相，并回收藻体在相同的条件下进行二次浸提，最后湿藻体在真空干燥箱，操作温度为40℃，真空度为2000 Pa中蒸脱24h，去除残留溶剂和水分，最终得到干藻渣；在污泥和藻渣中加水调节固体含量为8％，搅拌均匀后盖上带有导管的瓶塞，通入氮气吹扫掉瓶中残留空气，导管出口连接气袋用于气体的收集，温度控制在35±1℃，发酵15天；发酵结束后将厌氧发酵液经4000 rpm转速离心后去除上清液，剩余浆状物为沼渣； （2）微藻培养所述微藻藻种为小球藻（Chlorella vulgaris），保藏于美国德克萨斯藻种保藏中心，保藏编号为UTEX 2714；藻种的培养：藻种培养基成分为NH₄Cl 400 mg/L, KH₂PO₄ 56 mg/L,K₂HPO₄ 108 mg/L，MgSO₄ 7H₂O 100 mg/L，冰醋酸1 mg/L， 微量元素 1 ml/L，将藻种经无菌操作接种于灭过菌的培养基中，然后置于光照培养箱中静置培养，每天震荡3－4次，培养温度为15‑30℃，光照强度为2000‑4000 Lux，培养7天；（3）沼渣营养液培养：将（1）中所得微藻培养基用5 mol/L盐酸溶液调节pH至7，进行高压灭菌20min，将藻种经无菌操作接种于灭过菌的微藻培养基中，然后置于转速为180rpm的摇床中震荡培养，培养温度为28℃，光照强度为6000 Lux，培养7天。