LC3-I抗体的制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种LC3-I抗体的制备方法，包括如下操作步骤：抗原LC3-I对纯种BALB/c小鼠进行免疫处理，制备脾细胞悬液待用；取对数生长的SP2/0骨髓瘤细胞与步骤S1中制得的脾细胞按1∶5的比例混合，加入PEG溶液，SP2/0骨髓瘤细胞与脾细胞融合形成杂交瘤细胞并进行选择培养；在步骤S2选择培养期间检测LC3-I抗体，筛选出所需要的杂交瘤细胞，上述杂交瘤细胞接种小鼠腹腔，腹水经纯化后获得抗LC3-I抗体。上述制备的LC3-I抗体可用于自噬检测，作为用于研究自噬的形成及作用机制的工具。

主权项

一种LC3‑I抗体的制备方法，其特征在于，包括如下操作步骤：S1：抗原LC3‑I对纯种BALB／c小鼠进行免疫处理，无菌操作取出脾脏，制备脾细胞悬液待用；S2：取对数生长的SP2／0骨髓瘤细胞与步骤S1中制得的脾细胞按1∶5的比例混合，加入PEG溶液，SP2／0骨髓瘤细胞与脾细胞融合形成杂交瘤细胞并采用HAT选择培养液进行选择培养，HAT选择培养液维持7～10天后换用HT培养液，再维持2周，改用一般培养液培养；S3：在步骤S2选择培养期间检测LC3‑I抗体，筛选出所需要的杂交瘤细胞，上述杂交瘤细胞接种小鼠腹腔，腹水经纯化后获得抗LC3‑I抗体。