一种基于LAMP技术快速检测多菌灵高抗核盘菌菌株的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测多菌灵高抗核盘菌菌株的方法，可用于田间核盘菌对多菌灵抗性群体的动态监测及流行预警。本发明是以环介导恒温扩增技术(LAMP)为基础建立起来的一种快速检测核盘菌对多菌灵高抗菌株的分子技术。该检测方法通过在多菌灵高抗核盘菌菌株的β-微管蛋白上(包括198位氨基酸突变位点)设计2对LAMP特异性引物，进行LAMP扩增；根据反应产物颜色判定是否为多菌灵高抗核盘菌菌株；如果颜色为天蓝色(有扩增产物)为多菌灵高抗核盘菌菌株；如果颜色为紫色(无扩增产物)则为多菌灵敏感核盘菌菌株。本发明简便、快速、成本低，对菌核病抗性监测及合理用药具有重要的现实意义。

主权项

1.一种基于LAMP技术快速检测多菌灵高抗核盘菌菌株的方法，步骤是：(1)运用2对特异性引物对待鉴定菌株的基因组DNA进行LAMP恒温扩增，其中所述的2对特异性引物的碱基序列分别是：LAMP反应所用的外引物对：F3：TCGCCAAAGGTTTCCGATACB3：ACCAGGGAAACGGAGACAGLAMP反应所用的内引物对(含人为引入错配碱基)：FIP：GGCGTCAGAGTTCTCGACCAACGTCGTCGAGCCATATAACGBIP：CGTCAGAGTTCTCGACCAACGTCGTCGAGCCATATAACG(2)对上述LAMP扩增产物观察其颜色变化，并在3.0％琼脂糖凝胶电泳上分离，观察扩增结果；(3)鉴定是否为多菌灵高抗核盘菌菌株：如果LAMP扩增产物显示天蓝色，这时电泳图谱应为梯状条带，判定为多菌灵高抗核盘菌菌株；如果扩增产物为紫色，这时电泳图谱无条带扩增，判定为多菌灵敏感核盘菌菌株。