一种植物乳杆菌的电穿孔遗传转化方法

摘要

本发明提供了一种利用优化后的电穿孔技术对植物乳杆菌进行外源基因的高效遗传转化方法：利用添加最适浓度外源基因(质粒)、菌体最适生长状态，恢复培养基制成最适浓度的蔗糖溶液、以及控制电击后的恢复时间，从而实现了一种高效的电转化的方法使得外源DNA进入植物乳杆菌中。本发明的有益效果体现在：可以用于植物乳杆菌的分子生物学研究，如研究该菌降胆固醇的分子机制以及产酸耐胆盐的分子学机制；可以用来对植物乳杆菌实施基因工程从而进行遗传改良，提高降胆固醇的能力。

主权项

一种植物乳杆菌的电穿孔遗传转化方法，其特征在于所述的方法按如下步骤进行：1)将植物乳杆菌用MRS培养基，以显微镜检查计数，调整植物乳杆菌菌浓在10⁸cfu/mL；2)用于转化的外源DNA即质粒DNA溶于无菌去离子水至浓度为0.5ng/μL，每50μL感受态细胞加入0.5ng质粒DNA混匀；3)在预冷的电击杯中加入步骤2)所得混合液，用电穿孔仪进行电击；4)电击后电击杯中加入含蔗糖浓度为0～0.4M的MRS液体培养基，冰浴10分钟，37℃复苏2.5h，8000rpm离心1min涂布于含红霉素抗性的MRS培养基平板，37℃培养4d，转化子出现。所述的MRS培养基终浓度为：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，无水葡萄糖20.0g，磷酸氢二钾2.0g，乙酸钠5.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，柠檬酸铵2.0g，吐温1.0g，加入1000mL蒸馏水，调pH为6.2～6.4，121℃下灭菌，20分钟。5)转化子在含红霉素抗性的MRS培养基中长出，其红霉素的浓度为5μg/μL。