发明名称 | 一种巨大口蘑原生质体及其制备方法 | ||
摘要 | 本发明公开一种巨大口蘑原生质体的制备方法。所述制备方法,包括如下步骤:用渗透压稳定剂对巨大口蘑菌丝进行预处理,然后采用蜗牛酶与纤维素酶组成的混合酶液对巨大口蘑菌丝进行酶解,所述混合酶液中,纤维素酶的质量浓度为3.5~4.0%,蜗牛酶的质量浓度为0.5~1.0%,余量为渗透压稳定剂;最后对酶解液进行过滤,离心,所得沉淀即为巨大口蘑原生质体。本发明所用的混合酶液比单一的溶壁酶价格低一半以上,大大降低了科研中巨大口蘑原生质体的制备费用,为利用原生质体技术进行巨大口蘑育种和基因工程奠定了基础;同时,本发明的巨大口蘑原生质体的制备方法成本比传统的制备方法降低一半以上,而且得到的原生质体释放量和再生率均处于较高水平。 | ||
申请公布号 | CN102559576B | 申请公布日期 | 2014.05.28 |
申请号 | CN201210018448.7 | 申请日期 | 2012.01.18 |
申请人 | 华南农业大学 | 发明人 | 莫美华;马建伟;梁大伟;陈梅梅;马紫英;倪炎 |
分类号 | C12N5/04(2006.01)I | 主分类号 | C12N5/04(2006.01)I |
代理机构 | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人 | 林丽明 |
主权项 | 一种巨大口蘑原生质体的制备方法,其特征在于,具体包括如下步骤:(1)将巨大口蘑菌丝与渗透压稳定剂混合,于7000~10000r/min离心15~20 min,将所得沉淀用渗透压稳定剂洗涤,得到预处理后的菌丝;(2)将预处理后的菌丝按每300~500mg菌丝加入1mL的混合酶液中,置于29~32℃水浴恒温培养3.5~4.5h,隔30~40min摇动一次,得到酶解液;(3)对酶解液进行过滤,滤液于3000~4000r/min离心15~20min,弃上清液,收集沉淀,即得到所述巨大口蘑原生质体;所述混合酶液中,纤维素酶的质量浓度为3.5~4.0%,蜗牛酶的质量浓度为0.5~1.0%,余量为渗透压稳定剂;所述渗透压稳定剂为0.5mol/L的甘露醇溶液;所述巨大口蘑菌丝为菌龄为7~10d的巨大口蘑菌丝。 | ||
地址 | 510642 广东省广州市天河区五山路483号 |