一种富含生物素发酵棉粕的制备方法

摘要

本发明公开了一种富含生物素的发酵棉粕的制备方法，旨在提供一种节约了资源和成本，整个过程无污染，游离棉酚含量低于国标，维生素H含量较发酵前有明显提高，高达138mg/kg～420mg/kg的发酵棉粕的制备方法；其技术要点包括以下步骤：一级菌种制备；二级菌种制备；三级菌种制备；固体发酵；烘干粉碎；属于生物发酵技术领域。

主权项

一种富含生物素发酵棉粕的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： （1）一级菌种制备 从酵母菌斜面培养基中挑取一环酵母菌，接菌种到液体酵母菌种子培养基中，在28～35℃搅拌培养24～48小时，制得酵母菌一级菌种；从乳酸菌斜面培养基中挑取一环乳酸菌，接菌种到液体乳酸菌种子培养基中，在35～40℃静置培养24～48小时，制得乳酸菌一级菌种； （2）二级菌种制备 将步骤（1）中制得的酵母菌一级菌种按0.5～5%体积比的接菌种量接入盛有液体酵母菌种子培养基的菌种子发酵罐中，在28～35℃通气搅拌发酵24～60小时，制得酵母菌二级菌种；将步骤（1）制得的乳酸菌一级菌种按0.5～5%体积比的接菌种量接入盛有液体乳酸菌种子培养基的菌种子发酵罐中，在35～40℃静置培养24～48小时，制得乳酸菌二级菌种； （3）三级菌种制备 按0.5～5%体积比的接菌种量将步骤（2）中制得的酵母菌二级菌种接入盛有酵母菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为6.5～7.5，在28～35℃通气搅拌发酵24～72小时，制得酵母菌三级菌种；按0.5～5%体积比的接菌种量将步骤（2）中制得的乳酸菌二级菌种接入盛有乳酸菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为5.5～6.0，在35～40℃搅拌发酵24～72小时，制得乳酸菌三级菌种； （4）固体发酵 将步骤（3）中制得的酵母菌三级菌种和乳酸菌三级菌种分别以质量分数1～5%的接菌种量加入到发酵底物中，调节水分至40～60%，混合均匀后，堆垛发酵2～5天； （5）烘干粉碎 将步骤（4）发酵完成后的棉粕烘干、粉碎即可； 其中，步骤（1）所述的酵母菌斜面培养基包括以下组分：葡萄糖6g/L，蛋白胨3g/L，酵母膏1g/L，氯化钠0.5g/L，琼脂15g/L，酵母菌斜面培养基的pH为6.5～7.5；步骤（1）所述的乳酸菌斜面培养基包括以下组分：脱脂奶粉100.0g/L，酵母粉1g/L，K₂HPO₄5g/L，琼脂15g/L； 步骤(2）所述的酵母菌种子培养基包括以下组分：葡萄糖10g/L，尿素1g/L， K₂HPO₄0.1g/L，MgSO₄·7H₂O0.1g/L，玉米浆0.6g/L；所述的乳酸菌种子培养基包括以下组分：葡萄糖20.0g/L，蛋白胨10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母浸膏5.0g/L，无水乙酸钠5.0g/L，K₂HPO₄2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，MgSO₄·7H₂O0.58g/L，MnSO₄·H₂O0.33g/L； 步骤（3）所述酵母菌基本培养基包括以下组分：葡萄糖10g/L，尿素1g/L，K₂HPO₄0.1g/L，MgSO₄·7H₂O0.2g/L，玉米浆0.1g/L，CaCO₃3g/L；步骤（3）所述的乳酸菌基本培养基包括以下组分：葡萄糖20.0g/L，蛋白胨10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母浸膏5.0g/L，无水乙酸钠5.0g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，MgSO4·7H₂O0.58g/L，MnSO4·H₂O0.33g/L； 步骤（4）所述的发酵底物包括以下组分：棉粕75～90%，玉米粉5～25%，糖蜜1～10%，5000IU/g植酸酶0.05～0.2%，10000IU/g酸性蛋白酶0.05～1%，NH₄SO₄0.5%，K₂HPO₄0.2%，MgSO₄·7H₂O0.1%，CaCO₃0.1%，各组分之和为100%。