呕吐毒素免疫亲和柱的制备方法

摘要

本发明公开了一种基于呕吐毒素单克隆抗体的免疫亲和柱的制备方法。通过细胞融合所得到的单克隆抗体与溴化氰活化的琼脂糖4B偶联得到的免疫亲和吸附剂填充与固相萃取管中得到了可以特异性吸附呕吐毒素的免疫亲和柱。本发明制备的免疫亲和柱能特异性的与呕吐毒素结合，最大结合容量约为240ngDON；重复使用三次，回收率不低于90%。本发明可用于谷物及谷物制品检测呕吐毒素残留的前处理方法。

主权项

一种呕吐毒素免疫亲和柱的制备，其特征在于，是由固相载体和预期偶联的呕呕吐毒素单克隆抗体组成，具体步骤为：  （1）偶联：取纯化后的呕吐毒素单克隆抗体与溶胀后的CNBr‑Sepharose 4B凝胶共同放置于偶联缓冲液中，室温下震荡偶联；  （2）封闭：在偶联凝胶产物中加入其5～10倍体积的封闭缓冲液，室温下震荡反应2h；  （3）洗涤：分别用5～10倍封闭后凝胶体积的醋酸盐缓冲液和Tris‑HCL缓冲液交替洗涤3次，然后用5～10倍封闭后凝胶体积的PBS缓冲液洗涤2次，制备得到免疫亲和吸附剂；  （4）装柱：将得到的免疫亲和吸附剂填充到固相萃取柱中，加入PBS缓冲液后自然沉降，得到呕吐毒素免疫亲和柱，4度保存待用。