柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法

摘要

本发明公开了一种柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，包括过滤、蛋白沉淀处理、除色素处理、盐析、萃取、脱水浓缩和柱层析分离等步骤。本发明以羊胆汁作为提取原料，不仅降低了牛磺胆酸的提取成本，而且提取工艺更为简单，收益更高。本发明以柱层析分离法提取牛磺胆酸，柱层析分离纯化效果好，提取的牛磺胆酸精品无腥味、纯度高，且产品收率高，提取工艺简单，利于工业化大生产。

主权项

柱层析分离法提取羊胆汁中牛磺胆酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）过滤：取新鲜羊胆汁于双层沙布内静置过滤24～48小时，收集滤液；（2）蛋白沉淀处理：于步骤（1）的滤液中加入2～4倍体积量的蛋白沉淀剂，搅拌后以10000～20000rpm/min、4～10℃离心30～60分钟，收集得到黄绿色上清液；（3）除色素处理：于步骤（2）的上清液中加入10～20g/100ml活性碳，30～50℃加热10～30分钟，冷却后以10000～20000rpm/min、4～10℃离心30～60分钟，收集得到无色上清液；（4）浓缩：将步骤（3）的上清液于旋转蒸发仪浓缩10～20倍；（5）盐析：于步骤（4）的浓缩液体中加入10～50倍体积量的水，使用酸调节pH值为6.0～7.0，加入氯化钠至搅拌出现白色沉淀物，于4～10℃放置过夜；（6）萃取：用体积比为（4～10）：（1：3）氯仿：乙醇的混合液溶解步骤（5）的沉淀物，用分液漏斗萃取2～5次，蒸馏回收混合液的，得到粘稠液体；（7）脱水浓缩：将步骤（6）的粘稠液体用无水硫酸钠过滤除去其中水分，得到牛磺胆酸粗品；（8）柱层析分离：将上述牛磺胆酸粗品加入硅胶层析柱上，用体积比为2～4：0.5～1：2～4的氯仿、异丙醇和乙醇作为流动相洗脱，收集460 nm处有吸收值的液体，置于旋转蒸发仪中浓缩回收流动相，收集所得白色结晶冷冻保存，即为牛磺胆酸的纯品。